HCCR-2干扰真核表达载体的构建及其稳定转染细胞系的建立
Construction of RNAi recombinant eukaryotic expression vectors of HCCR-2 and establishment of its stably transfected cell lines
-
摘要: 目的 构建HCCR-2于扰真核表达载体,获得干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系.方法 人工合成HCCR-2基因干扰序列并定向插入到RNAi真核表达载体PGenesil-l,通过测序鉴定.将干扰质粒用脂质体法转染HeoG2细胞,经G418持续压力选择和有限稀释法获得稳定转染的细胞系.RT-PCR检测筛选克隆HCCR-2 mRNA的表达水平.结果 测序表明HCCR-2干扰序列及读框完全正确,干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系在倒置荧光显微镜下呈绿色荧光.RT-PCR结果显示RNAi-H1、RNAi-H3序列对HCCR-2 mRNA有较好的抑制效果.结论 成功构建了HCCR-2干扰真核表达载体,HCCR-2干扰质粒稳定转染的HepG2细胞系的建立为进一步研究HCCR-2在肝癌细胞中的作用奠定了基础.
下载: