电穿孔法基因转染K562细胞条件的优化
Optimization of Electroporation Parameters for K562 Cells DNA transfection
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摘要: 目的 以绿色荧光蛋白(GFP)为观察指标优化K562细胞的电穿孔基因转染条件.方法 通过改变悬液体积、温度及缓冲液、质粒浓度等转染条件,采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒DNA转入K562细胞,通过流式细胞仪和荧光显微镜观察转染效率.结果 ①在电压250 V、电容950ìF的条件下,K 562细胞得到58.6%的最大转染率.②应用0.4 mL细胞悬液体积,当质粒浓度≥20ìg/mL时可得到较高的转染效率.③温度和缓冲液中的血清成分对电穿孔效率影响不大.结论 电穿孔是一种高效的基因转染法,通过优化条件,可提高转染率.
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