乳腺癌已成为导致女性死亡的第2位原因，但其确切的致病机制仍不清楚^[1]。目前，临床上主要采用手术、放化疗等手段治疗乳腺癌，能在一定程度上控制病情。部分患者因早期症状不明显，确诊时已是中晚期癌，从而错过最佳治疗时机。因此，寻找一种有效的检测手段对控制乳腺癌的病情有很大帮助^[2-3]。在正常生理状态下，人体内辅助性T细胞17(Th17)与调节性T细胞(Treg)之间维持着动态平衡，而某些疾病状态如肿瘤可引发病理性免疫应答，导致免疫失调^[4]。铁蛋白(SF)是一种在乳腺癌细胞中呈高表达的蛋白，对乳腺癌细胞的增殖和凋亡具有重要调节作用^[5]。也有研究^[6]发现，微小核糖核酸(miR)和基质金属蛋白酶均在乳腺癌的发生、发展中发挥重要作用，但目前微小核糖核酸-145(miR-145)、微小核糖核酸-132(miR-132)在乳腺癌中的表达及其与临床病理的相关性尚不完全明确。本研究选取92例乳腺癌患者进行回顾性研究，为临床诊治乳腺癌提供参考依据，现报告如下。

1.   资料与方法

1.1   一般资料

选取2022年1月—2023年12月92例乳腺癌患者作为研究组，临床分期为Ⅰ~Ⅱ期35例，Ⅲ~Ⅳ期57例; 肿瘤直径>2 cm、≤2 cm分别为43、49例; 年龄31~62岁，平均(44.19±2.57)岁; 存在淋巴结转移51例，无淋巴结转移41例; 体质量指数(BMI)18~25 kg/m²，平均(22.03±0.25) kg/m²; 肿瘤分化程度为中低分化61例，高分化31例。另选取同期乳腺良性疾病(如乳腺炎)患者105例为对照组，年龄31~63岁，平均(44.23±2.61)岁; BMI为18~25 kg/m², 平均(21.96±0.27) kg/m²。纳入标准: ①依据《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2015版)》^[7]诊断为乳腺癌者; ②行影像学及临床病理检查确诊为乳腺癌者; ③能够积极配合完成实验室检查者; ④年龄超过30周岁者。排除标准: ①存在严重肝肾等脏器损伤、免疫系统异常、全身性感染及凝血功能异常者; ②患有库欣综合征和甲状腺机能亢进等内分泌系统疾病者; ③伴有其他严重恶性肿瘤者; ④伴有精神异常者。本研究已获得医院伦理委员会批准。

1.2   方法

资料收集: 在医院电子病历系统中收集所选患者临床资料，包括临床分期、年龄、肿瘤分化程度、肿瘤直径、BMI及是否存在淋巴结转移等。检测研究组与对照组患者Th17与Treg的比值(Th17/Treg)以及SF水平、miR-145和miR-132表达水平，收集所选患者空腹静脉血6 mL, 取其中2 mL, 采用济南中科瑞正生物科技有限公司生产的流式细胞仪(型号: CasCyte-S7型)检测Th17、Treg水平，并计算Th17/Treg; 取剩余4 mL, 3 500 r/min离心10 min收集血清，取其中2 mL血清采用Trizol法提取总核糖核酸(RNA), 采用北京宝日医生物技术有限公司提供的Takara试剂盒反转录得到互补脱氧核糖核酸(cDNA)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法(ABI Prizm7300序列检测系统)进行扩增，引物由广州锐博生物科技有限公司完成, miR-145上游、下游引物分别为5′-CCTCACGGTCCAGTTTTCCC-3′、5′-CC ATGACCTCAAGAACAGTATTTCC-3′; miR-132上游、下游引物分别为5′-GCCGATAACAGTCTACAG C-3′、5′-CAGTGCAGGGTCCGAGG-3′。反应体系: 共20 μL, 包括cDNA模板2.0 μL、上下游引物各1.0 μL、12.5 μL GreenPremixExTaq^TM Ⅱ、双蒸馏水8.5 μL; 反应条件: 循环40次, 95 ℃预变性、变性，分别反应30、5 s, 60 ℃退火30 s, 72 ℃延伸15 s。miR-145、miR-132相对表达量用2^-ΔΔCt法计算; 取剩余2 mL血清，应用全自动化学发光免疫分析仪(武汉友芝友医疗科技股份有限公司，型号: YZY-CIP-C100)检测血清SF水平。

1.3   观察指标

分析并比较2组患者Th17/Treg以及SF、miR-145和miR-132水平变化。比较研究组不同病理参数患者Th17/Treg以及SF、miR-145和miR-132水平。以对照组作为阴性病例，以研究组作为阳性病例，采用受试者工作特征(ROC)曲线分析Th17/Treg、SF、miR-145、miR-132对乳腺癌的诊断价值。

1.4   统计学方法

所有数据均采用SPSS 26.0软件进行分析，计量资料(经S-W法检验，均符合正态分布)以(x±s)表示，比较行t检验，计数资料以[n(%)]表示，行χ²检验，使用MedCalc软件11.4版绘制ROC曲线。P < 0.05为差异有统计学意义。

2.   结果

2.1   2组Th17/Treg以及SF、miR-145和miR-132水平变化

与对照组比较，研究组外周血Th17/Treg、血清SF水平均更高，血清miR-145、miR-132表达水平更低，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 1。

表  1  2组Th17/Treg、SF水平以及miR-145和miR-132表达水平比较(x±s)

组别	n	Th17/Treg	SF/(ng/mL)	miR-145	miR-132
对照组	105	0.41±0.05	43.88±8.15	1.03±0.09	1.02±0.08
研究组	92	0.49±0.06*	96.72±6.59*	0.47±0.06*	0.39±0.04*
Th17/Treg: 辅助性T细胞17与调节性T细胞的比值; SF: 铁蛋白; miR-145: 微小核糖核酸-145; miR-132: 微小核糖核酸-132。与对照组比较, * P < 0.05。

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2.2   研究组不同病理参数患者Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平变化

与肿瘤直径≤2 cm、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、不存在淋巴结转移的患者比较，肿瘤直径>2 cm、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、存在淋巴结转移患者的血清miR-145、miR-132表达水平均更低，差异有统计学意义(P < 0.05); 与临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、不存在淋巴结转移的患者比较，临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、存在淋巴结转移患者的血清SF水平均更高，差异有统计学意义(P < 0.05); 与不存在淋巴结转移的患者比较，存在淋巴结转移的患者的Th17/Treg更高，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 2。

表  2  研究组不同病理参数患者Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平变化(x±s)

临床病理参数	n	Th17/Treg高表达	t	P	SF/(ng/mL)	t	P	miR-145	t	P	miR-132	t	P
肿瘤直径	—	—	1.795	0.076	—	0.955	0.342	—	2.051	0.043	—	10.058	< 0.001
>2 cm	43	0.45±0.08	—	—	109.68±21.05	—	—	0.49±0.07	—	—	0.38±0.06	—	—
≤2 cm	49	0.42±0.08	—	—	106.03±15.49	—	—	0.52±0.07	—	—	0.53±0.08	—	—
临床分期	—	—	0.950	0.345	—	27.472	< 0.001	—	25.531	< 0.001	—	10.372	< 0.001
Ⅰ~Ⅱ期	35	0.45±0.11	—	—	61.33±9.52	—	—	0.70±0.07	—	—	0.48±0.07	—	—
Ⅲ~Ⅳ期	57	0.47±0.09	—	—	128.73±12.44	—	—	0.38±0.05	—	—	0.35±0.05	—	—
肿瘤分化程度	—	—	0.927	0.356	—	15.396	< 0.001	—	11.441	< 0.001	—	12.794	< 0.001
中低分化	61	0.51±0.15	—	—	133.46±22.05	—	—	0.33±0.04	—	—	0.32±0.06	—	—
高分化	31	0.48±0.14	—	—	70.07±8.54	—	—	0.44±0.05	—	—	0.51±0.08	—	—
是否存在淋巴结转移	—	—	6.676	< 0.001	—	14.790	< 0.001	—	17.201	< 0.001	—	28.738	< 0.001
是	51	0.55±0.09	—	—	131.06±24.15	—	—	0.41±0.06	—	—	0.35±0.05	—	—
否	41	0.43±0.08	—	—	71.49±10.03	—	—	0.68±0.09	—	—	0.71±0.07	—	—

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2.3   Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平对乳腺癌的诊断价值

Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平联合检测诊断乳腺癌的曲线下面积(AUC)为0.889, 大于以上指标单独检测的AUC(0.764、0.753、0.682、0.724, P < 0.05), 且联合检测的敏感度、特异度均更高，见表 3和图 1。

表  3  Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平对乳腺癌的诊断价值

指标	AUC	95%CI	P	敏感度/%	特异度/%	约登指数
Th17/Treg	0.764	0.698~0.821	< 0.001	66.30	77.14	0.435
SF	0.753	0.687~0.812	< 0.001	70.65	73.33	0.440
miR-145	0.682	0.612~0.747	< 0.001	67.39	64.76	0.322
miR-132	0.724	0.656~0.786	< 0.001	69.57	61.90	0.315
联合检测	0.889	0.836~0.929	< 0.001	85.87	80.95	0.668

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图  1  Th17/Treg以及SF、miR-145、miR-132水平对乳腺癌的诊断价值

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3.   讨论

乳腺癌早期临床表现不具典型性，易被患者忽视，多数患者确诊时已处于中晚期^[8-12]。因此，早期诊断对于改善乳腺癌患者预后至关重要。目前，乳腺病变的诊断方法以乳房X线摄影为主，临床诊断价值较高^[13-16]。然而，由于特定检查需求或成像清晰度不足，该方法可能需重复拍摄以获取多视角图像信息，延长了患者射线暴露时间，增大潜在健康风险。相比之下，血液中某些标志物的检测具有便捷性、可重复性、成本效益高及无创性等优点，在各类癌症诊断中占据重要地位^[17-20]。

Th17、Treg是2种CD4⁺T细胞，参与机体的免疫应答和免疫耐受^[21-23]。研究^[24]指出，乳腺癌患者外周血中Th17升高，其具有抑制肿瘤免疫和促进其增殖、分化的作用。miR-132具有非编码功能，研究^[25]发现其可通过调控多种蛋白激酶的表达来抑制肿瘤细胞的形成、聚集和增殖，从而抑制肿瘤的发展。

miR-145是抑癌基因，既往研究^[26-28]指出, miR-145在乳腺癌患者中表达显著降低，且与肿瘤的恶性程度呈负相关。SF是一种在人体内广泛分布的蛋白质，不仅参与铁的代谢，还参与许多组织的代谢活动。研究^[29]发现, SF可在许多实体恶性肿瘤中合成和分泌; 乳腺癌的发展过程中，铁的有效利用减少，使血清中的SF含量增加。因此, SF不仅可以反映体内铁含量，而且可以作为一种肿瘤标记物。本研究发现，与对照组比较，研究组外周血Th17/Treg、血清SF水平均更高，血清miR-145、miR-132表达水平则更低，提示Th17/Treg、SF水平以及miR-145和miR-132表达水平在乳腺癌患者血液中均呈异常表达。

本研究结果显示，与肿瘤直径≤2 cm、临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、不存在淋巴结转移的患者比较，肿瘤直径>2 cm、临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、存在淋巴结转移患者的血清miR-145、miR-132表达水平均更低; 与临床分期为Ⅰ~Ⅱ期、肿瘤高分化、不存在淋巴结转移的患者比较，临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、肿瘤中低分化、存在淋巴结转移患者的血清SF水平均更高; 与不存在淋巴结转移的患者比较，存在淋巴结转移的患者的Th17/Treg水平更高。以上结果提示Th17/Treg、SF水平以及miR-145和miR-132表达水平与乳腺癌患者的病理参数均存在一定关系。分析原因发现：乳腺癌患者Treg通过与效应性T淋巴细胞密切接触抑制效应性细胞的功能，产生抗肿瘤免疫效应，从而缓解机体对肿瘤的抑制效应。Th17在乳腺癌中具有促炎、抗肿瘤功能，但随着疾病的进展，其会促血管新生功能增强，从而促进肿瘤侵袭转移。此外, Th17、Treg也参与炎性反应及自身免疫疾病的发生，促使血管增生，上皮-间质转化，最终导致乳腺癌的发生、发展。miR-132是一种在乳腺癌组织中呈低表达的miR，通过调控转录因子的转录，负性调控相关信号通路，从而影响乳腺癌的发展和转移; miR-145在乳腺癌血液中的表达，则随着肿瘤直径、分期和恶性程度的升高而显著下降。

SF是一种重要的调控因子，广泛分布于人体各组织，且在乳腺癌患者血清中的表达显著增高，推测乳腺癌细胞可能通过调控SF异构体的合成和分泌，导致SF的增加。本研究发现, SF水平以及miR-145和miR-132表达水平联合检测的AUC大于以上指标单独检测，提示Th17/Treg、SF水平以及miR-145和miR-132表达水平在乳腺癌的临床诊断中具有更高的价值，原因可能在于上述各个指标联合检测能够互相弥补各自缺点，从而提高对乳腺癌的诊断价值。

综上所述, Th17/Treg、SF水平以及miR-145和miR-132表达水平在乳腺癌患者血液中均呈异常表达，与患者病理参数均存在一定关系，且联合检测在乳腺癌的临床诊断中具有较高的价值。但本研究仅涉及检验相关指标诊断乳腺癌，缺少与病理学、影像学诊断标准的比较，后期需借助信息技术进一步开展多中心研究进行深入研究。