艾滋病(AIDS)是危害极大的传染病，由感染人类免疫缺陷病毒(HIV)引起，HIV可攻击机体免疫系统，大量破坏淋巴细胞，使患者丧失免疫功能，从而更易感染各类疾病，病死率较高^[1]。AIDS传播速度快、潜伏期长、危害范围广，采取有效方法诊断及监测HIV对控制病毒传播、指导治疗及判断预后意义重大^[2]。检测HIV抗体是判断HIV感染的重要指标，国内现阶段初筛HIV主要应用双抗体夹心法，其中酶联免疫吸附法(ELISA)操作复杂、检测周期长，而电化学发光免疫法(ECLIA)具有简便、快捷的优势^[3]。本研究比较ELISA与ECLIA筛查HIV抗体的效果，现报告如下。

1.   资料与方法

1.1   血样来源

选取2017年1月—2018年6月本院进行HIV检测的血液样本12 457份。受检者男7 218例，女5 239例; 年龄18~60岁，平均(31.27±7.09)岁。

1.2   仪器与试剂

ELISA应用Bio-Rad 680型酶标仪及新创试剂; ECLIA应用Caris 200电化学发光全自动免疫分析仪及其配套试剂。

1.3   方法

1.3.1   ELISA检测

将待检血液以800转/min离心，分离血清，严格按照HIV抗体检测试剂盒说明进行操作。取出酶标板，设置3孔阳性对照、2孔阴性对照、1孔空白对照、1孔样品，并进行标记。每孔(除空白孔)分别加对应阳性、阴性对照品及样品各100 μL。孵育(30min)、洗板(6次)、拍干。每孔(除空白孔)加酶标记抗原100 μL, 再次孵育(20 min)、洗板(6次)、拍干。加底物液，避光反应15 min后加终止液终止反应。应用酶标仪读取各孔吸光度(OD)值, cut-off值=阴性对照OD均值+0.1, 样品OD值>cut-off值为阳性。

1.3.2   ECLIA检测

将待测样品与生物素抗HIV-1p24单克隆抗体孵育成抗原-抗体复合物，应用磁石收集磁微粒，除去未反应物质，加抗HIV抗原[经碱性磷酸酶(ALP)标记]与磁微粒的HIV抗体反应，再次应用磁石收集磁微粒，除去未反应物质，加入发光底物搅拌，分散磁微粒，添加清洗剂。检测复合物发光强度，计算cut-off值。

2.   结果

2.1   检测阳性率

12 457份血样中, ELISA检出阳性标本35份，检测阳性率为0.28%; ECLIA检出阳性标本32份，检测阳性率为0.26%; 经HIV确认中心检测确认共30份阳性。ELISA与ECLIA检测HIV抗体阳性率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2   符合情况

ELISA检出阳性血样的OD/CO值(CO为cut-off值)多在1.35~1.80范围内(P < 0.05), 占全部阳性检出标本的62.86%(22/35), 且ELISA的OD/CO值越大，与确认结果的符合率越高; ECLIA检出阳性血样的cut-off值多在150.00~220.00(P < 0.05), 占全部阳性检出标本62.50%(20/32), 且ECLIA的cut-off值越大，与确认结果的符合率越高。见表 1、2。

表  1  ELISA检测结果与确认结果符合情况

阳性例数/例	酶联免疫吸附法
	OD/CO	确诊例数/例	符合率/%
5	0.15~0.45	3	60.00*
5	0.45~1.35	4	80.00*
22	1.35~1.80	20	90.91
3	1.80~6.00	3	100.00*
与OD/CO值1.35~1.80比较, *P < 0.05。

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表  2  ECLIA检测结果与确认结果符合情况

阳性例数/例	电化学发光免疫法
	cut-off	确诊例数/例	符合率/%
4	0.90~80.00	3	75.00*
6	80.00~150.00	5	83.33*
20	150.00~220.00	20	100.00
2	220.00~300.00	2	100.00
与cut-off值150.00~220.00、220.00~300.00比较, *P < 0.05。

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3.   讨论

国内AIDS筛查的主要方法是血清病毒抗体检测，同时辅之以病毒及抗原检测，其中HIV抗体检测是诊断AIDS的重要指标。多数HIV感染可持续终生，且HIV潜伏期较长，AIDS患者发病前可无症状地生活多年^[4]。ELISA及ECLIA均是中国检测HIV的常用方法，本研究比较2种检测方法在HIV抗体检测中的效果。研究结果显示, ELISA检出阳性标本35份，检测阳性率为0.28%; ECLIA检出阳性标本32份，检测阳性率为0.26%; 2种方法检测阳性率无显著差异。

ELISA是将抗原或抗体吸附于固相载体表面并应用酶标记抗原抗体反应的技术，具有载体易于标准化等优点^[5]。但ELISA需分离游离抗原、抗体及结合态抗原、抗体，需反复加样、洗板，操作步骤繁琐，造成误差的概率较大，且酶标板的孔间差异也可导致变异系数增高，增加了临床诊断难度^[6]。研究^[7]指出，对于低浓度HIV标本, ELISA可因灵敏度低等原因造成假阴性。ECLIA是电化学发光、免疫测定相结合的技术，包含磁性微珠包被、生物素-亲和素技术等多种先进技术，具有灵敏度高、可自动化、线性范围宽、标记物有效期长等优点，可大幅度提高HIV抗体检测准确率^[8-9]。

本研究应用罗氏Caris 200电化学发光全自动免疫分析仪，实现了检测自动化、标准化，有助于降低批内、批间误差。本研究中2种检测方法检测的阳性血样经HIV确认中心确认后有30份为阳性。ELISA检出阳性血样的OD/CO值多在1.35~1.80范围内, ECLIA检出阳性血样的cut-off值多在150.00~220.00范围内，且随ELISA、ECLIA检测的OD/CO值或cut-off值增大，与确认结果的符合率越高。在较低浓度下, ECLIA检测HIV抗体与确认结果的符合率较ELISA更高，提示ECLIA检测HIV抗体准确率优于ELISA, 与韩春俐等^[10]研究结论一致。

ECLIA包括电化学反应及化学发光过程，标记抗原与抗体发生特异性结合后启动电发光过程，且电化学反应、化学发光过程可循环进行，因此ECLIA具高灵敏性特点^[11]。本研究中, ECLIA测定在封闭的流动系统中进行，有效降低交叉污染，同时保证了试剂的稳定性，测定结果准确可靠。ECLIA完成仅需20 min左右，而ELISA需1~2 h方可出结果, ECLIA较ELISA大幅缩短了初筛时间，有助于提高临床工作效率。研究^[12]提出ECLIA较传统抗体分析法可提前发现HIV感染，缩短诊断窗口期。ELISA的优点众多，但其成本相对较高，基层医院较难普及，同时任何检测方法均无法完全排除样本品不存在低浓度抗体，ECLIA检测阴性同样不能完全排除HIV感染的可能性，临床应用需结合多方面情况考虑。