A study on fingerprint and common peaks identification of water-soluble components in Bombyx Batryticatus
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摘要:目的 采用液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）技术对僵蚕水溶性物质中化学成分进行定性分析，建立僵蚕的指纹图谱和共有峰识别的分析方法。方法 采用Acclaim PA 25 μm C18色谱柱（4.6 mm×250.0 mm），流动相A和B分别为0.2%磷酸溶液和乙腈，流速为0.2 mL/min，柱温为30℃，检测波长为265 nm。采用电喷雾离子源正负离子模式，检测LC-MS/MS获得的特征峰的分子量和分子碎片，并进行特征峰结构指认。结果 僵蚕水溶性成分的指纹图谱发现19个共有峰，通过LC-MS/MS识别出其中10个共有峰。10批不同产地的僵蚕药材指纹图谱的相似度评价结果显示，相似度值为0.985~1.000。结论 本研究建立的基于LC-MS/MS的僵蚕指纹图谱分析方法具有选择性好、专属性强和灵敏度高等优点，可以为僵蚕药材的质量评价提供技术参考。Abstract:Objective To qualitatively analyze the water-soluble components in Bombyx Batryticatus by liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) technique and establish the analytical methods of fingerprint and common peaks identification.Methods The column was Acclaim PA 25 μm C18 column (4.6 mm×250.0 mm), the mobile phase A and B were 0.2% phosphoric acid solution and acetonitrile respectively, the flow rate was 0.2 mL/min, the column temperature was 30℃, and the detection wave length was 265 nm. An electrospray ionization in both negative and positive ion modes was used to detect the molecular weight and fragment molecular of characteristic peaks obtained by LC-MS/MS, and characteristic peaks were identified.Results A total of 19 common peaks were found in the fingerprints of water-soluble components of Bombyx Batryticatus, and 10 of them were identified by LC-MS/MS. The similarity evaluation results of fingerprints of 10 batches of Bombyx Batryticatus from different producing areas showed that the similarity was between 0.985 and 1.000.Conclusion In this study, the method of fingerprint analysis based on LC-MS/MS is characterized by high selectivity, specificity and sensitivity, which can provide technical reference for quality evaluation of Bombyx Batryticatus.
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表 1 样品来源信息
样品批次 产地 批号 S1 江苏苏州 20200129 S2 江苏泰州 20200204 S3 广东佛山 20200228 S4 广东汕头 20200329 S5 四川仁寿 20200405 S6 广西南宁 20200301 S7 山东烟台 20200105 S8 四川南充 20200603 S9 四川绵阳 20200428 S10 四川凉山 20200629 
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表 2 流动相梯度洗脱梯度表
时间/min 0.2%的磷酸水溶液/% 乙腈/% 0 99 1 10 95 5 15 85 15 20 80 20 30 80 20 35 65 35 40 99 1
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表 3 10批僵蚕样品HPLC指纹图谱的相似度
样品批次 相似度 S1 1.000 S2 0.998 S3 0.986 S4 0.998 S5 0.986 S6 0.998 S7 0.986 S8 0.985 S9 0.986 S10 0.985
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表 4 僵蚕水提物共有峰的HPLC-MS/MS分析
峰 保留时间/min 离子模式 分子式 分子量m/z(误差ppm) MS/MS 化合物鉴定 5 3.36 [M-H]- C5H5N5 135.031 1(-0.61) 119.013 9, 81.040 1, 16.072 1 腺嘌呤[15] 6 4.07 [M+K]+ C15H10O7 302.246 1(-1.51) 153.113 2, 137.266 1, 69.109 7 槲皮素[16] 7 4.28 [M-H]- C3H7NO2 89.094 4(-0.91) 44.025 2, 42.035 7, 18.018 8 丙氨酸[17] 8 5.41 [M+K]+ C4H7N3O 113.087 5(+0.87) 98.057 2, 84.045 8, 96.035 2 肌酐[15] 9 6.07 [M-H]- C29H50O 414.715 0(-1.23) 382.026 5, 329.036 1, 145.031 0 β-谷甾醇[17] 12 8.15 [M-H]- C4H4N2O2 112.094 2(-1.42) 69.037 3, 42.999 5, 28.025 1 尿嘧啶[17] 13 10.20 [M+H]+ C2H8N2O4 142.088 8(+1.20) 45.053 3, 28.015 3, 16.025 6 草酸铵[17] 16 17.03 [M+H]+ C9H12N2O6 244.200 2(-4.02) 112.030 8, 213.035 7, 132.024 9 尿苷[15] 17 18.21 [M+H]+ C10H14N2O5 242.237 5(-1.90) 117.112 9, 126.038 1, 73.047 8 β-胸苷[15] 19 26.39 [M+H]+ C10H12N5O4 267.223 1(+0.41) 135.006 0, 132.000 0, 119.030 6 腺苷[15]
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1. 曾俊雅. 胶原交联的改性研究进展(1). 西部皮革. 2024(10): 3-7 . 
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