Anti-ovarian cancer mechanism of processed products of Aconitum soongaricum Stapf. based on network pharmacology
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摘要:目的 运用网络药理学探讨准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的作用机制。方法 根据准噶尔乌头与乌头属植物具有化学亲缘性的特点，利用中药系统药理学数据库和分析平台（TCMSP）、中药分子机制的生物信息学分析工具（BATMAN-TCM）等数据库并结合文献收集、筛选准噶尔乌头及其炮制品、乌头属植物有效活性成分。利用Swiss、GeneCards、基因表达数据库（GEO）等数据库预测药物和疾病的靶点。采用Draw Venn Diagram软件识别准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点，在Cytoscape 3.6.1软件中构建“疾病-药物-成分-靶点”网络。利用String数据库和Cytoscape 3.6.1软件构建关键靶点蛋白互作网络图；利用DAVID和R软件对关键靶点进行富集分析。结果 得到准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的有效活性成分27个，关键靶点152个。准噶尔乌头碱、脱氧乌头碱、次乌头碱等可能是主要活性成分，其作用于PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、表皮生长因子受体（EGFR）等靶点，参与癌症途径信号通路、PI3K-Akt信号通路、血管内皮生长因子（VEGF）信号通路、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路等多条信号通路，发挥抗卵巢癌作用。结论 准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌具有多成分、多靶点、多通路的特点，为开发具有民族特色的抗卵巢癌新药提供了思路。Abstract:Objective To explore the anti-ovarian cancer mechanism of processed products of Aconitum soongaricum Stapf. based on network pharmacology.Methods According to the characteristics of chemical phylogeny in Aconitum soongaricum Stapf. and Aconitum, the databases such as Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform (TCMSP) and the Bioinformatics Analysis Tool for Molecular Mechanism of Traditional Chinese Medicine (BATMAN-TCM) in combination with literatures were used to collect and screen effective active ingredients of Aconitum soongaricum Stapf. and its processed products as well as Aconitum plants. Databases such as Swiss, GeneCards and Gene Expression Omnibus (GEO) were used to predict the targets of drugs and diseases. Draw Venn Diagram software was used to identify the key targets of processed products of Aconitum soongaricum Stapf. against ovarian cancer, and a "disease-drug-component-target" network was built in the Cytoscape 3.6.1 software. String database and Cytoscape 3.6.1software were used to construct the key target protein interaction network diagram. DAVID and R software were used to perform enrichment analysis of key targets.Results A total of 27 effective active ingredients and 152 key targets of processed products of Aconitum soongaricum Stapf. against ovarian cancer were obtained. Songorine, deoxyaconitine and hypoaconitine might be the main active ingredients, which acted on PIK3CA, PIK3CB, PIK3CD, PIK3CG, epidermal growth factor receptor (EGFR) and other targets, and participated in cancer pathway signaling pathways, PI3K-Akt signaling pathways, vascular endothelial growth factor (VEGF) signal pathways, hypoxia inducible factor-1 (HIF-1) signaling pathways and other signaling pathways to play an anti-ovarian cancer effect.Conclusion Processed products of Aconitum soongaricum Stapf. against ovarian cancer have the characteristics of multiple components, multiple targets and multiple pathways, which can provide ideas for the development of new anti-ovarian cancer drugs with national characteristics.
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Keywords:
- Aconitum soongaricum Stapf. /
- processed products /
- ovarian cancer /
- network pharmacology /
- mechanism
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卵巢癌起病隐匿，约70%的患者发现时已属晚期，病死率居妇科恶性肿瘤的首位[1-2]。目前卵巢癌的治疗方法为手术、放疗和化疗，但化疗具有较强的毒副作用及耐药性，且复发率高[3-5]。中医研究[6]认为肿瘤是因正气亏虚，气滞、血瘀、痰结、湿聚、热毒等互相搏结，日久积滞形成肿块而导致，可采用乌头属的辛温之药以毒攻毒、开结破凝，以温阳散寒之法治疗肿瘤。现代药理研究[7]也证实乌头类中药对肿瘤治疗效果显著。准噶尔乌头是毛茛科植物准噶尔乌头的干燥块根，专产于中国新疆维吾尔自治区北部地区，作为哈萨克族重要的传统民族药材，准噶尔乌头在哈萨克族民间常被作为“药用乌头”，《哈萨克药志》等文献[8-10]记载其性味辛、苦、大热，有毒，炮制减毒后用于治疗风湿性关节炎、腹部肿块、肋间神经痛等。研究[11]表明准噶尔乌头炮制品具有一定的抗肿瘤活性，但作用机制尚不明确。网络药理学[12]关注整体性和系统性的特点与中医药学的整体观念相吻合，有助于探索中药多成分、多靶点、多途径的作用机制。本研究采用网络药理学方法预测准噶尔乌头炮制品的抗卵巢癌潜在作用机制，现将结果报告如下。
1. 材料与方法
1.1 试验药物
准噶尔乌头及其炮制品、乌头属植物。目前国内外未见准噶尔乌头及其炮制品抗卵巢癌作用机制的文献且有关准噶尔乌头的文献很少，故本研究利用准噶尔乌头与乌头属植物具有化学亲缘性的特点扩大检索范围[13-15], 收集准噶尔乌头及乌头属植物全部化学成分，并从中筛选活性成分纳入准噶尔乌头炮制品活性成分中研究。
1.2 数据库、分析平台及软件
本研究使用的数据库、分析平台及软件见表 1。
表 1 数据库、分析平台及软件名称 网址 版本 中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP) https://lsp.nwu.edu.cn/tcmp.php 2.3 中药综合数据库(TCM-ID) http://www.megabionet.org/tcmid/ 2.03 中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM) http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/ 更新于2016.01 治疗靶点数据库(TTD) http://db.idrblab.net/ttd/ 更新于2020.06.01 疾病基因数据库(DisGeNET) https://www.disgenet.org/home/ 更新于2020.05 基因名片数据库(GeneCards) https://www.genecards.org/ 5.0 基因表达数据库(GEO) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ 更新于2020.11.16 靶标预测在线平台(SwissTargetPrediction) http://swisstargetprediction.ch/ 瑞士生物信息研究所-2020 有机小分子生物活性数据(PubChem) https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ 更新于2020.10.19 蛋白质数据库(UniProt) https://www.uniprot.org/ 更新于2020.08.03 Cytoscape软件 https://cytoscape.org/ 3.6.1 Draw Venn Diagram在线软件 http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/ — R语言 https://www.r-project.org/ 3.6.3 生物信息数据库(DAVID) https://david.ncifcrf.gov/ 6.8 蛋白质相互作用数据库(String) https://string-db.org/ 11.0b 1.3 药物活性成分收集与筛选
通过TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID及文献收集准噶尔乌头及其炮制品、乌头属植物所有化学成分。根据口服生物利用度(OB)与类药性(DL)对成分进行筛选。考虑到样本量及数据的复杂性，筛选标准定为: OB≥20%，DL≥0.14[16]。
1.4 药物作用靶点预测及有效活性成分-靶点网络图构建
通过PubChem数据库确认筛选出的活性成分，下载其2D结构导入Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测。借助TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID数据库对确认的活性成分进行靶点预测。将获得的全部药物靶点去重，导入Uniprot数据库校正靶点信息，得到准噶尔乌头炮制品有效活性成分作用靶点。经Cytoscape 3.6.1可视化处理，构建有效活性成分-靶点网络图。
1.5 人卵巢癌靶点筛选
在TTD数据库中以“Ovarian cancer”为关键词，检索得到人卵巢癌相关靶点; 在DisGeNET数据库中以“Ovarian cancer”为关键字进行检索，选取其中基因-疾病关联评分(score_gda)>0.05的靶点信息进行研究[17]; 在GeneCards数据库中以“Ovarian cancer”为关键字进行检索，选取其中相关度得分(relevance score)≥20的靶点信息进行研究[18]。
在GEO数据库中以“Ovarian cancer”为关键词检索相关芯片，获取编号为GSE18520的芯片文件和GPL570的芯片基因注释文件。该芯片数据包含53例卵巢癌标本和10例正常卵巢表面上皮(OSE)刷。对芯片数据进行基因差异表达在线分析，筛选出显著差异基因，筛选标准为: P＜0.05, 差异倍数(FC)>4[19]。应用R语言ggplot2程序包绘制火山图。最终获得人卵巢癌的差异表达基因。
将TTD、DisGeNET、GeneCard数据库中获取的人卵巢癌相关靶点与GEO数据库中获得的人卵巢癌差异表达基因取并集，将并集中的靶点信息导入Uniprot数据库进行校对，最终获得人卵巢癌相关靶点。
1.6 准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点挖掘
将1.4标题内容中预测到的药物作用靶点与1.5标题内容中检索到的人卵巢癌潜在靶点经Draw Venn Diagram在线软件取交集，获得准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点，并绘制维恩图。
1.7 “疾病-药物-成分-靶点”网络构建
将1.6标题内容中得到的准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点与活性成分对应的靶点进行比对，筛选出能够作用到关键靶点上的活性成分，剔除未作用到关键靶点上的活性成分，整合对应有效活性成分，导入Cytoscape 3.6.1软件，构建“疾病-药物-成分-靶点”网络。
1.8 DAVID富集分析
采用DAVID数据库对关键靶点进行基因本体(GO)生物学功能分析及京都基因和基因组数据库(KEGG)富集分析。运用R语言ggPlot2程序包对GO富集分析结果中满足P＜0.05且按P值升序排列的前20条结果绘制条形图，对KEGG富集分析结果中满足P＜0.05且按P值升序排列的前20条结果绘制气泡图。
1.9 关键靶点蛋白互作网络构建
将1.6标题内容中挖掘出的关键靶点映射到String数据库，选择物种为人，以最低要求互动得分0.7为筛选参数[20]，对结果进行整合，借助Cytoscape 3.6.1进行可视化处理，构建准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的关键靶点蛋白质互作(PPI)网络图并进行网络分析。
2. 结果
2.1 准噶尔乌头炮制品活性成分
从TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID及文献中获得准噶尔乌头及其炮制品、乌头属植物化学成分577个，按照同时满足OB≥20%、DL≥0.14的标准筛选出有效活性成分41个。
2.2 准噶尔乌头炮制品作用靶点及有效活性成分-靶点网络图
通过PubChem数据库对41个有效活性成分确认后，借助Swiss Target Prediction、TCMSP、BATMAN-TCM、TCM-ID预测有效活性成分靶点，得到有对应靶点的有效活性成分30个，见表 2。经Cytoscape 3.6.1进行可视化处理，构建有效活性成分-靶点网络图，其中有效活性成分的作用靶点627个，有效活性成分与对应靶点间存在1 703个相互关系。见图 1。
表 2 准噶尔乌头炮制品有效活性成分信息成分代码 活性成分 MW OB/% DL MOL000131 EIC(亚油酸) 280.50 41.90 0.14 MOL000359 sitosterol(谷甾醇) 414.79 36.91 0.75 MOL000538 hypaconitine(次乌头碱) 615.79 31.39 0.26 MOL001641 methyl linoleate(亚油酸甲酯) 294.53 41.93 0.17 MOL001676 vilmorrianine C(黄草乌碱丙) 627.85 33.96 0.22 MOL002086 1-[(5R, 8R, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17S)-12-hydroxy-10, 13-dimethyl-2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-tetradecahydro-1H-cyclopenta (a) phenanthren-17-yl]ethanone {1-[(5R, 8R, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17S)-12-羟基-10, 13-甲基l-2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-十四氢-1H-环戊烷(a)菲-17-基]乙酮} 318.55 33.47 0.42 MOL002087 delta4, 16-Androstadien-3-one(4, 16-雄甾烷-3-酮) 270.45 37.63 0.31 MOL002211 11, 14-eicosadienoic acid(11, 14-二十碳二烯酸) 308.56 39.99 0.20 MOL002392 deltoin(石防风素) 328.39 46.69 0.37 MOL002395 deoxyandrographolide(去氧穿心莲内酯) 334.50 56.30 0.31 MOL002397 karakoline(多根乌头碱) 377.58 51.73 0.73 MOL002398 karanjin(水黄皮次素) 292.30 69.56 0.34 MOL002401 neokadsuranic acid B(新南五味子酸B) 452.74 43.10 0.85 MOL002402 senbusine A(川附子碱A) 423.61 22.26 0.71 MOL002410 benzoylnapelline(苯甲酰萘啉) 463.67 34.06 0.53 MOL002416 deoxyaconitine(脱氧乌头碱) 629.82 30.96 0.24 MOL002419 (R)-norcoclaurine(去甲乌药碱) 271.34 82.54 0.21 MOL002420 hokbusine A 603.78 21.74 0.26 MOL002421 ignavine(惰碱) 449.59 84.08 0.25 MOL002417 fuzitine(附子亭) 342.45 25.79 0.54 MOL002423 jesaconitine(结乌头根碱) 675.85 33.41 0.19 MOL002431 songorine(准噶尔乌头碱) 357.54 24.46 0.27 MOL002433 (3R, 8S, 9R, 10R, 13R, 14S, 17R)-3-hydroxy-4, 4, 9, 13, 14-pentamethyl-17-{(E, 2R)-6-methyl-7-【(2R, 3R, 4S, 5S, 6R)-3, 4, 5-trihydroxy-6-〔[(2R, 3R, 4S, 5S, 6R)-3, 4, 5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl) oxan-2-yl]oxymethyl〕oxan-2-yl】oxyhept-5-en-2-yl}-1, 2, 3, 7, 8, 10, 12, 15, 16, 17-decahydr 781.10 41.52 0.22 MOL002590 karacolidine(多根乌头定碱) 393.58 60.53 0.71 MOL004749 3-acetylaconitine(3-乙酰乌头碱) 687.86 37.05 0.20 MOL004756 crassicauline A(草乌甲素A) 643.85 34.13 0.21 MOL004757 yunaconitine(滇乌头碱) 659.85 33.56 0.20 MOL004759 napelline(纳哌林) 359.56 34.48 0.72 MOL004763 izoteolin 327.41 39.53 0.51 MOL005257 penniclavin 270.36 48.15 0.31 2.3 人卵巢癌作用靶点
在TTD、DisGeNET、GeneCards数据库中分别获得人卵巢癌靶点42、70、788个。在GEO数据库中获得1 145个显著差异基因(去重后为1 139个)，其中上调基因516个，下调基因629个，绘制人卵巢癌差异基因火山图，见图 2。将上述4个数据库中获得的人卵巢癌靶点及人卵巢癌显著差异基因取并集，经Uniprot数据库校对，最终得到人卵巢癌靶点1 667个。
2.4 准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点
将627个准噶尔乌头炮制品有效活性成分作用靶点与1 667个人卵巢癌靶点经Draw Venn Diagram在线软件取交集，获得准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌关键靶点152个，并以“靶点名称(缩写)”的形式表示: 即72 kDa type Ⅳ collagenase(MMP2)、transketolase(TKT)、estradiol 17-beta-dehydrogenase 1(HSD17B1)、estradiol 17-beta-dehydrogenase 2(HSD17B2)、high affinity nerve growth factor receptor(NTRK1)、matrilysin(MMP7)、nitric oxide synthase(NOS2)、fibroblast growth factor receptor 1(FGFR1)、hepatocyte growth factor receptor(MET)、cytochrome P450 2D6(CYP2D6)、C5a anaphylatoxin chemotactic receptor 1 (C5AR1)、G1/S-specific cyclin-E1(CCNE1)、amine oxidase (flavin-containing) A (MAOA)、cyclin-dependent kinase 1 (CDK1)、focal adhesion kinase 1(PTK2)、sex hormone-binding globulin(SHBG)、cholinesterase(BCHE)、apoptosis regulator Bcl-2(BCL2)、phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit beta isoform(PIK3CB)、endothelin-1 receptor(EDNRA)、gonadotropin-releasing hormone receptor(GNRHR)、beta-secretase 2(BACE2)、retinoic acid receptorbeta(RARB)、aurora kinase A (AURKA)、alpha-1A adrenergic receptor (ADRA1A)、aryl hydrocarbon receptor(AHR)、dihydrofolate reductase(DHFR)、aurora kinase B(AURKB)、aromatase(CYP19A1)、latelet-derived growth factor receptor beta(PDGFRB)、integrin beta-1(ITGB1)、mast/stem cell growth factor receptor Kit(KIT)、tyrosine-protein kinase JAK2(JAK2)、prostaglandin G/H synthase 2(PTGS2)、G1/S-specific cyclin-D1(CCND1)、neuropeptide Y receptor type 1(NPY1R)、estrogen receptor (ESR1)、cyclin-dependent kinase 4(CDK4)、thymidylate synthase(TYMS)、cGMP-inhibited 3′, 5′-cyclic phosphodiesterase A(PDE3A)、dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 4(MAP2K4)、phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit delta isoform(PIK3CD)、cyclin-A2(CCNA2)、interstitial collagenase(MMP1)、solute carrier family 2(SLC2A1)、indoleamine 2, 3-dioxygenase 1(IDO1)、vascular endothelial growth factor receptor 1(FLT1)、tyrosine-protein kinase receptor UFO(AXL)、mitogen-activated protein kinase 1(MAPK1)、matrix metalloproteinase-14(MMP14)、E3 ubiquitin-protein ligase Mdm2(MDM2)、epidermal growth factor receptor(EGFR)、receptor tyrosine-protein kinase erbB-2(ERBB2)、mitogen-activated protein kinase 8(MAPK8)、proteinase-activated receptor 1(F2R)、tyrosine-protein kinase ABL1(ABL1)、high affinity cAMP-specific 3′, 5′-cyclic phosphodiesterase 7A(PDE7A)、mitogen-activated protein kinase 12(MAP3K12)、beta-glucuronidase(GUSB)、serine/threonine-protein kinase Chk2(CHEK2)、telomerase reverse transcriptase(TERT)、proto-oncogene tyrosine-protein kinase Src(SRC)、cyclin-dependent kinase 2(CDK2)、progesterone receptor(PGR)、serine/threonine-protein phosphatase 2A catalytic subunit alpha isoform(PPP2CA)、steroid 17-alpha-hydroxylase/17, 20 lyase(CYP17A1)、gamma-aminobutyric acid receptor subunit beta-3(GABRB3)、plasminogen(PLG)、serine/threonine-protein kinase PAK 4(PAK4)、phosphatidylinositol 3-kinase regulatory subunit alpha(PIK3R1)、acetyl-CoA carboxylase 2(ACACB)、beta-3 adrenergic receptor(ADRB3)、isocitrate dehydrogenase 1(IDH1)、histone deacetylase 1(HDAC1)、P2X purinoceptor 7(P2RX7)、estrogen receptor beta(ESR2)、ephrin type-B receptor 4(EPHB4)、cytochrome P450 1B1(CYP1B1)、M-phase inducer phosphatase 1(CDC25A)、prostaglandin E2 receptor EP3 subtype(PTGER3)、deoxycytidine kinase(DCK)、arachidonate 5-lipoxygenase(ALOX5)、protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2(TGM2)、tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 11(PTPN11)、serine/threonine-protein kinase PLK1(PLK1)、dipeptidyl peptidase 4(DPP4)、serine/threonine-protein kinase Chk1(CHEK1)、kinesin-like protein KIF11(KIF11)、potassium voltage-gated channel subfamily H member 2(KCNH2)、peroxisome proliferator-activated receptor gamma(PPARG)、protein kinase C delta type(PRKCD)、proto-oncogene tyrosine-protein kinase receptor Ret(RET)、multidrug resistance protein 1(ABCB1)、cannabinoid receptor 1(CNR1)、glucocorticoid receptor(NR3C1)、serine/threonine-protein kinase mTOR(MTOR)、integrin-linked protein kinase(ILK)、mitogen-activated protein kinase 14(MAPK14)、cyclin-dependent kinase 6(CDK6)、tyrosine-protein kinase CSK(CSK)、RAF proto-oncogene serine/threonine-protein kinase(RAF1)、gamma-aminobutyric acid receptor subunit beta-2(GABRB2)、signal transducer and activator of transcription 3(STAT3)、sphingosine kinase 1(SPHK1)、TGF-beta receptor type-1(TGFBR1)、type-1 angiotensin Ⅱ receptor(AGTR1)、cathepsin D(CTSD)、Kelch-like ECH-associated protein 1(KEAP1)、induced myeloid leukemia cell differentiation protein Mcl-1(MCL1)、G1/S-specific cyclin-D3(CCND3)、interleukin-6(IL6)、heat shock protein HSP 90-alpha(HSP90AA1)、poly (ADP-ribose) polymerase 1(PARP1)、vitamin D3 receptor(VDR)、max-like protein X(MLX)、rho-associated protein kinase 1(ROCK1)、vascular endothelial growth factor receptor 2(KDR)、UDP-N-acetylglucosamine-peptide N-acetylglucosaminyltransferase 110 kDa subunit(OGT)、ATP-binding cassette sub-family G member 2(ABCG2)、multiple endocrine neoplasia 1(MEN1)、retinoic acid receptor alpha(RARA)、tyrosine-protein phosphatase non-receptor type 1(PTPN1)、beta-secretase 1(BACE1)、phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit gamma isoform(PIK3CG)、NAD(P)H dehydrogenase (quinone) 1(NQO1)、phosphatidylinositol 4, 5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform(PIK3CA)、Interleukin-2(IL2)、DNA topoisomerase 2-alpha(TOP2A)、insulin-like growth factor 1 receptor(IGF1R)、calcitonin gene-related peptide type 1 receptor(CALCRL)、intercellular adhesion molecule 1(ICAM1)、Bcl-2-like protein 1(BCL2L1)、mitogen-activated protein kinase 3(MAPK3)、inhibitor of nuclear factor kappa-B kinase subunit epsilon(IKBKE)、hypoxia-inducible factor 1-alpha(HIF1A)、Toll-like receptor 4(TLR4)、tyrosine-protein kinase JAK1(JAK1)、fatty acid-binding protein(FABP4)、G1/S-specific cyclin-D2(CCND2)、RAC-alpha serine/threonine-protein kinase(AKT1)、dual specificity mitogen-activated protein kinase 1(MAP2K1)、high affinity cAMP-specific and IBMX-insensitive 3′, 5′-cyclic phosphodiesterase 8B(PDE8B)、prostaglandin G/H synthase 1(PTGS1)、macrophage colony-stimulating factor 1 receptor(CSF1R)、transcription factor AP-1(JUN)、dual specificity protein kinase TTK(TTK)、androgen receptor(AR)、protein kinase C alpha type(PRKCA)、trypsin-1(PRSS1)、ribosomal protein S6 kinase beta-1(RPS6KB1)、matrix metalloproteinase-9(MMP9)、DNA topoisomerase 1(TOP1)。绘制的维恩图见图 3。
2.5 “疾病-药物-成分-靶点”网络图
应用Cytoscape 3.6.1软件构建“疾病-药物-成分-靶点”网络图，该网络中共有181个节点，其中红色为疾病节点，共1个; 蓝色为药物节点，共1个; 紫色为成分节点，共27个(剔除了3个未作用到关键靶点上的活性成分); 绿色为靶点节点，共152个; 共663条边。见图 4。
2.6 DAVID富集分析
通过DAVID数据库富集分析获得GO条目559条(P＜0.05), 其中生物过程(BP)条目404个，主要包括蛋白磷酸化、信号转导、细胞增殖正调控等; 细胞组成(CC)条目67个，主要包括细胞周期素依赖性蛋白激酶全酶复合物、磷脂酰肌醇-3-激酶复合物等; 分子功能(MF)条目88个，主要包括ATP结合、蛋白酪氨酸激酶活性、蛋白丝氨酸激酶活性等。按P值排序，将每个模块前20位条目使用R语言ggplot2程序包绘制条形图，横坐标为富集基因的个数，柱的颜色代表-log10(P)值的大小，颜色由蓝到红表示-log10(P)值递增，见图 5。
通过DAVID数据库对关键靶点进行KEGG通路富集分析得到108条通路(P＜0.05), 其中包括癌症途径、PI3K/Akt信号通路、VEGF信号通路、HIF-1信号通路等。按P值排序，选取前20位通路，使用R语言ggplot2程序包绘制气泡图，横坐标表示该通路所富集的基因占总体输入基因的比率，气泡颜色越红提示-log10(P)值越大，表示KEGG通路富集越显著，气泡越大表示KEGG通路越重要，见图 6。
2.7 关键靶点PPI网络
152个关键靶点映射到String数据库，隐藏无相互关联的靶点，获得关键靶点相互作用网络图，包含148个靶点(4个靶点未参与), 1 052条边，平均自由度为13.8, 平均局部聚类系数为0.54。借助Cytoscape 3.6.1进一步进行可视化处理，构建出准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的关键靶点PPI网络图，并使用Cytoscape 3.6.1软件中Network Analyzer工具对网络中的节点进行相关参数分析，其中degree值越大、节点越大、节点的颜色越深，节点的颜色由绿色变为橙色，表示该节点越重要; combine score值越大、边越粗，表示由该边代表的靶点间关系越密切，见图 7。
2.8 核心靶点分析
通过Cytoscape 3.6.1计算, PPI网络中节点的度值的中位值为24.500, 介数的中位值为302.240, 紧密度的中位值为0.164, 度值、介数和紧密度均超过中位值的靶点共18个，分别为AKT1、MAPK1、PIK3CA、STAT3、SRC、MAPK3、HSP90AA1、PIK3R1、EGFR、MAPK8、JAK2、IL6、CCND1、JUN、MMP9、ESR1、MAPK14、AR。这些节点可能是准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌的核心靶点。
3. 讨论
卵巢癌是严重危害女性健康的常见恶性肿瘤之一。目前，化疗药物的毒副作用和耐药是卵巢癌治疗中的重要问题。中医[6]认为肿瘤属“积聚”“癥瘕”等范畴，采用乌头类大辛大温之品，以其温阳散寒之功治疗肿瘤已得到医学界的认可[21]。准噶尔乌头在哈萨克族民间作为“药用乌头”长期使用，研究[11]表明，准噶尔乌头具有一定的抗卵巢癌活性，但作用机制不明确。
本研究发现准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌活性成分27个，包括准噶尔乌头碱、脱氧乌头碱、次乌头碱、亚油酸甲酯等。准噶尔乌头碱、脱氧乌头碱、次乌头碱是准噶尔乌头中已明确的化学成分[22-23], 其余活性成分是根据准噶尔乌头与乌头属植物具有化学亲缘性的特点[13-15], 通过以乌头属植物代表性化学成分扩大数据库检索范围而收集到的乌头属植物含有的化学成分。本研究预测出准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌作用靶点可能是PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG、EGFR、MAPK1、MAPK3、CDK6等。PIK3CA、PIK3CB、PIK3CD、PIK3CG是磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)的催化异构体。PI3K是原癌基因，能磷酸化磷脂酰肌醇、磷脂酰肌醇4-磷酸和磷脂酰肌醇4，5-二磷酸，生成磷脂酰肌醇3, 4, 5-三磷酸(PIP3), PIP3招募PH结构域蛋白到细胞膜，包括AKT1和PDPK1, 从而激活涉及细胞生长、生存、增殖、运动和形态的信号级联，发挥关键作用[24]。EGFR是表皮生长因子受体家族成员之一，能激活多种下游信号通路，促进肿瘤细胞增殖、侵袭和转移[25-26]。研究[27]表明EGFR是解决上皮性卵巢癌化疗耐药问题新的治疗靶点。MAPK1、MAPK3属于丝/苏氨酸蛋白激酶, MAPK在许多肿瘤中都表现出异常表达，在卵巢癌组织中, MAPK1、MAPK3均高表达，表明其在卵巢癌中可能被异常激活, MAPK1、MAPK3可能是卵巢癌的作用靶点[28]。CDK6作为重要的细胞周期促进因子，参与诱导肿瘤细胞的增殖, CDK6过表达在卵巢癌发病和导致不良预后方面发挥了重要的作用, CDK6可作为潜在靶点用于卵巢癌的治疗[29]。
本研究预测出准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌信号通路有癌症途径、PI3K/Akt信号通路、VEGF信号通路、HIF-1信号通路等，其中PI3K-Akt信号通路通过多种途径抑制肿瘤细胞凋亡。PI3K/Akt信号通路通过活化PI3K后产生PIP3，进而活化Akt，促进肿瘤血管形成，加剧肿瘤侵袭和转移[30]。卵巢癌的发生、发展以及化疗耐药都与PI3K/AKT信号通路的过度激活密切相关，该通路能够介导卵巢癌细胞的迁移和侵袭，抑制卵巢癌细胞的凋亡和自噬[31-33]。VEGF信号通路是上皮性卵巢癌多药耐药相关信号通路之一[34]。研究[35]表明，通过使用血管抑制剂竞争性结合血管内皮生长因子受体的激酶结构域，可以抑制VEGF通路，从而明显提高晚期卵巢癌患者的存活率。缺氧是实体肿瘤微环境的基本特征之一，肿瘤内的缺氧环境与肿瘤的侵袭、转移密切相关[36-37]。HIF-1是在缺氧条件下普遍存在的重要调节因子[38-39], HIF-1由α亚基(α亚基影响HIF-1的活性)和β亚基(β亚基是结构性亚基)构成[40-41]。HIF-1对基因表达的调节导致葡萄糖摄取和氧化，能量产生和血管生成的改变，进而调节多种靶基因转录，使得糖酵解限速酶激活，有氧糖酵解增加、葡萄糖摄取率提高等，从而促进肿瘤细胞在缺氧或低氧条件下增殖、侵袭及转移[42-43]。研究[44-45]表明，通过抑制HIF-1α途径，可以下调HK2、LDHA表达，从而抑制卵巢癌细胞的糖酵解，有效抑制卵巢癌细胞增殖。
综上所述，本研究通过综合运用网络药理学技术探讨准噶尔乌头炮制品抗卵巢癌可能的关键靶点及分子机制，为治疗卵巢癌提供新的切入点，为民族药的开发利用提供新的思路。由于本研究结论是借助网络药理学技术对数据库进行挖掘得出，为保证网络药理学预测结果的可靠性和准确性，后续仍需进一步实验验证。
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表 1 数据库、分析平台及软件
名称 网址 版本 中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP) https://lsp.nwu.edu.cn/tcmp.php 2.3 中药综合数据库(TCM-ID) http://www.megabionet.org/tcmid/ 2.03 中药分子机制的生物信息学分析工具(BATMAN-TCM) http://bionet.ncpsb.org/batman-tcm/ 更新于2016.01 治疗靶点数据库(TTD) http://db.idrblab.net/ttd/ 更新于2020.06.01 疾病基因数据库(DisGeNET) https://www.disgenet.org/home/ 更新于2020.05 基因名片数据库(GeneCards) https://www.genecards.org/ 5.0 基因表达数据库(GEO) https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ 更新于2020.11.16 靶标预测在线平台(SwissTargetPrediction) http://swisstargetprediction.ch/ 瑞士生物信息研究所-2020 有机小分子生物活性数据(PubChem) https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ 更新于2020.10.19 蛋白质数据库(UniProt) https://www.uniprot.org/ 更新于2020.08.03 Cytoscape软件 https://cytoscape.org/ 3.6.1 Draw Venn Diagram在线软件 http://bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/ — R语言 https://www.r-project.org/ 3.6.3 生物信息数据库(DAVID) https://david.ncifcrf.gov/ 6.8 蛋白质相互作用数据库(String) https://string-db.org/ 11.0b 
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表 2 准噶尔乌头炮制品有效活性成分信息
成分代码 活性成分 MW OB/% DL MOL000131 EIC(亚油酸) 280.50 41.90 0.14 MOL000359 sitosterol(谷甾醇) 414.79 36.91 0.75 MOL000538 hypaconitine(次乌头碱) 615.79 31.39 0.26 MOL001641 methyl linoleate(亚油酸甲酯) 294.53 41.93 0.17 MOL001676 vilmorrianine C(黄草乌碱丙) 627.85 33.96 0.22 MOL002086 1-[(5R, 8R, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17S)-12-hydroxy-10, 13-dimethyl-2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-tetradecahydro-1H-cyclopenta (a) phenanthren-17-yl]ethanone {1-[(5R, 8R, 9S, 10S, 12R, 13S, 14S, 17S)-12-羟基-10, 13-甲基l-2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 11, 12, 14, 15, 16, 17-十四氢-1H-环戊烷(a)菲-17-基]乙酮} 318.55 33.47 0.42 MOL002087 delta4, 16-Androstadien-3-one(4, 16-雄甾烷-3-酮) 270.45 37.63 0.31 MOL002211 11, 14-eicosadienoic acid(11, 14-二十碳二烯酸) 308.56 39.99 0.20 MOL002392 deltoin(石防风素) 328.39 46.69 0.37 MOL002395 deoxyandrographolide(去氧穿心莲内酯) 334.50 56.30 0.31 MOL002397 karakoline(多根乌头碱) 377.58 51.73 0.73 MOL002398 karanjin(水黄皮次素) 292.30 69.56 0.34 MOL002401 neokadsuranic acid B(新南五味子酸B) 452.74 43.10 0.85 MOL002402 senbusine A(川附子碱A) 423.61 22.26 0.71 MOL002410 benzoylnapelline(苯甲酰萘啉) 463.67 34.06 0.53 MOL002416 deoxyaconitine(脱氧乌头碱) 629.82 30.96 0.24 MOL002419 (R)-norcoclaurine(去甲乌药碱) 271.34 82.54 0.21 MOL002420 hokbusine A 603.78 21.74 0.26 MOL002421 ignavine(惰碱) 449.59 84.08 0.25 MOL002417 fuzitine(附子亭) 342.45 25.79 0.54 MOL002423 jesaconitine(结乌头根碱) 675.85 33.41 0.19 MOL002431 songorine(准噶尔乌头碱) 357.54 24.46 0.27 MOL002433 (3R, 8S, 9R, 10R, 13R, 14S, 17R)-3-hydroxy-4, 4, 9, 13, 14-pentamethyl-17-{(E, 2R)-6-methyl-7-【(2R, 3R, 4S, 5S, 6R)-3, 4, 5-trihydroxy-6-〔[(2R, 3R, 4S, 5S, 6R)-3, 4, 5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl) oxan-2-yl]oxymethyl〕oxan-2-yl】oxyhept-5-en-2-yl}-1, 2, 3, 7, 8, 10, 12, 15, 16, 17-decahydr 781.10 41.52 0.22 MOL002590 karacolidine(多根乌头定碱) 393.58 60.53 0.71 MOL004749 3-acetylaconitine(3-乙酰乌头碱) 687.86 37.05 0.20 MOL004756 crassicauline A(草乌甲素A) 643.85 34.13 0.21 MOL004757 yunaconitine(滇乌头碱) 659.85 33.56 0.20 MOL004759 napelline(纳哌林) 359.56 34.48 0.72 MOL004763 izoteolin 327.41 39.53 0.51 MOL005257 penniclavin 270.36 48.15 0.31
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[1] SAVANEVICH A, ASHURYK O, CYBULSKI C, et al. BRCA1 and BRCA2 mutations in ovarian cancer patients from Belarus: update[J]. Hered Cancer Clin Pract, 2021, 19(1): 13. doi: 10.1186/s13053-021-00169-y
[2] GORODNOVA T V, SOKOLENKO A P, KOTIV K B, et al. Neoadjuvant therapy of BRCA1-driven ovarian cancer by combination of cisplatin, mitomycin C and doxorubicin[J]. Hered Cancer Clin Pract, 2021, 19(1): 14. doi: 10.1186/s13053-021-00173-2
[3] ITTIUDOMRAK T, PUTHONG S, ROYTRAKUL S, et al. Α-mangostin and apigenin induced cell cycle arrest and programmed cell death in SKOV-3 ovarian cancer cells[J]. Toxicol Res, 2019, 35(2): 167-179. doi: 10.5487/TR.2019.35.2.167
[4] MA R Q, TANG Z J, YE X, et al. Overexpression of GPNMB predicts an unfavorable outcome of epithelial ovarian cancer[J]. Arch Gynecol Obstet, 2018, 297(5): 1235-1244. doi: 10.1007/s00404-018-4699-3
[5] CHEN Y, BI F, AN Y, et al. Identification of pathological grade and prognosis-associated lncRNA for ovarian cancer[J]. J Cell Biochem, 2019, 120(9): 14444-14454. doi: 10.1002/jcb.28704
[6] 张佳艺, 闫梓乔, 杜璐瑶, 等. 乌头抗肿瘤的应用及研究[J]. 中医药导报, 2019, 25(10): 45-49. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-HNZB201910014.htm [7] 胡世文, 罗静, 况刚, 等. 长江三峡地区乌头属药用植物资源分布及其综合利用研究[J/OL]. 中药材, 2020, 43(9): 2137-2140. [8] 徐新, 巴哈尔古丽·黄尔汗, 巴杭·扎卡里亚, 等. 哈萨克药志[M]. 北京: 民族出版社, 2009: 447-449. [9] 吾买尔夏提, 魏岩. 新疆药用乌头的民族植物学[J]. 中国野生植物资源, 2004, 23(4): 29-30. doi: 10.3969/j.issn.1006-9690.2004.04.010 [10] 赵翡翠. 新疆准噶尔乌头亲缘关系、炮制毒效活性及化学成分研究[D]. 乌鲁木齐: 新疆医科大学, 2015. [11] 张丽娟. 新疆准噶尔乌头生物碱及水解产物抗肿瘤活性研究[D]. 乌鲁木齐: 新疆医科大学, 2019. [12] 赵炳聪, 李亚鸿, 解红霞. 网络药理学在中药复方作用机制研究中的应用[J]. 中国中医药信息杂志, 2020, 27(3): 133-136. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XXYY202003034.htm [13] 赵翡翠, 闫向君, 王伟, 等. 新疆准噶尔乌头高效液相色谱指纹图谱的建立[J]. 中国医院药学杂志, 2015, 35(6): 485-490. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGYZ201506005.htm [14] ZHAO F C, NIE J H, CHEN M Z, et al. Assessment of genetic characteristics of Aconitum germplasms in Xinjiang Province (China) by RAPD and ISSR markers[J]. Biotechnol Biotechnol Equip, 2015, 29(2): 309-314. doi: 10.1080/13102818.2015.1004899
[15] 肖培根, 王锋鹏, 高峰, 等. 中国乌头属植物药用亲缘学研究[J]. 植物分类学报, 2006, 44(1): 1-46. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZWFX200601000.htm [16] 郑洋, 王佳慧, 梁天坚, 等. 基于网络药理学分析莪术的作用机制[J]. 中华中医药学刊, 2020, 38(2): 15-18, 260. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZYHS202002005.htm [17] 曹建, 朱晓燃, 杨振寰, 等. 基于网络药理学探讨清肝化瘀颗粒对非酒精性脂肪性肝病和肝癌"异病同治"的作用机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2021, 27(7): 151-160. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZSFX202107022.htm [18] 于迎春, 赵阳, 梁素萍, 等. 山茱萸-肉苁蓉药对治疗帕金森的网络药理学研究[J]. 中成药, 2020, 42(11): 3034-3040. doi: 10.3969/j.issn.1001-1528.2020.11.041 [19] 骆帝, 梁学振, 刘金豹, 等. 乌头汤治疗骨关节炎作用机制的网络药理学研究[J]. 中国药房, 2019, 30(19): 2632-2638. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGYA201919009.htm [20] 周毅, 陈跃平, 章晓云, 等. 复方中药圣愈汤治疗股骨头坏死机制的网络药理学分析[J]. 中国组织工程研究, 2021, 25(17): 2687-2696. doi: 10.3969/j.issn.2095-4344.3138 [21] 黄越燕, 周吉芳, 徐佳颖. 有毒中药抗肿瘤作用的研究进展[J]. 山东医药, 2017, 57(2): 108-112. doi: 10.3969/j.issn.1002-266X.2017.02.037 [22] 赵翡翠, 姜林, 刘淑敏, 等. 新疆乌头属植物中双酯型生物碱的含量测定[J]. 中国医院药学杂志, 2012, 32(20): 1603-1606. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZGYZ201220004.htm [23] 姜婷, 轩辕欢, 付玲, 等. 准噶尔乌头中4种生物碱在炮制过程中的含量变化[J]. 中成药, 2016, 38(12): 2641-2646. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-ZCYA201612024.htm [24] 李潇. YWHAE与HE4相互作用调控PI3K/AKT和MAPK信号通路影响卵巢癌恶性生物学行为及其机制研究[D]. 沈阳: 中国医科大学, 2020. http://cdmd.cnki.com.cn/article/cdmd-10159-1020384097.htm [25] KLUPP F, SASS M, BERGMANN F, et al. Impact of EGFR and EGFR ligand expression on treatment response in patients with metastatic colorectal cancer[J]. Oncol Lett, 2021, 21(6): 448. doi: 10.3892/ol.2021.12709
[26] XU B, TAO T, WANG Y, et al. Hsa-miR-135a-1 inhibits prostate cancer cell growth and migration by targeting EGFR[J]. Tumour Biol, 2016, 37(10): 14141-14151. doi: 10.1007/s13277-016-5196-6
[27] POURSHEIKHANI A, YOUSEFI H, TAVAKOLI-BAZZAZ J, et al. EGFR blockade reverses cisplatin resistance in human epithelial ovarian cancer cells[J]. Iran Biomed J, 2020, 24(6): 370-378. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32660222/
[28] 王一子, 任芳, 栾南南. 姜黄素作用于卵巢癌靶基因的生物信息学预测[J]. 现代肿瘤医学, 2017, 25(24): 3924-3928. doi: 10.3969/j.issn.1672-4992.2017.24.002 [29] 凌晨, 刘蜀, 王勇, 等. CDK6在早期卵巢癌中表达及其临床意义[J]. 南方医科大学学报, 2016, 36(9): 1271-1275. doi: 10.3969/j.issn.1673-4254.2016.09.19 [30] 徐利本, 吴朝阳, 王远东. PI3K/Akt信号传导通路在肿瘤发生发展及治疗中的作用[J]. 现代肿瘤医学, 2021, 29(1): 177-180. doi: 10.3969/j.issn.1672-4992.2021.01.040 [31] LIU L, WU N, WANG Y, et al. TRPM7 promotes the epithelial-mesenchymal transition in ovarian cancer through the calcium-related PI3K/AKT oncogenic signaling[J]. J Exp Clin Cancer Res, 2019, 38(1): 106. doi: 10.1186/s13046-019-1061-y
[32] HUANG T T, LAMPERT E J, COOTS C, et al. Targeting the PI3K pathway and DNA damage response as a therapeutic strategy in ovarian cancer[J]. Cancer Treat Rev, 2020, 86: 102021. doi: 10.1016/j.ctrv.2020.102021
[33] ZHOU J, JIANG Y Y, CHEN H, et al. Tanshinone I attenuates the malignant biological properties of ovarian cancer by inducing apoptosis and autophagy via the inactivation of PI3K/AKT/mTOR pathway[J]. Cell Prolif, 2020, 53(2): e12739. doi: 10.1111/cpr.12739
[34] MOMENY M, SABOURINEJAD Z, ZARRINRAD G, et al. Anti-tumour activity of tivozanib, a Pan-inhibitor of VEGF receptors, in therapy-resistant ovarian carcinoma cells[J]. Sci Rep, 2017, 7: 45954. doi: 10.1038/srep45954
[35] WIND S, SCHMID U, FREIWALD M, et al. Clinical pharmacokinetics and pharmacodynamics of nintedanib[J]. Clin Pharmacokinet, 2019, 58(9): 1131-1147. doi: 10.1007/s40262-019-00766-0
[36] KOIZUME S, ITO S, NAKAMURA Y, et al. Lipid starvation and hypoxia synergistically activate ICAM1 and multiple genes in an Sp1-dependent manner to promote the growth of ovarian cancer[J]. Mol Cancer, 2015, 14: 77. doi: 10.1186/s12943-015-0351-z
[37] 施宣忍, 刘群, 王莉, 等. 缺氧微环境下HIF-1α对卵巢癌A2780细胞侵袭转移的影响及分子机制[J]. 现代妇产科进展, 2017, 26(3): 174-178. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XDFC201703004.htm [38] LAGORY E L, GIACCIA A J. The ever-expanding role of HIF in tumour and stromal biology[J]. Nat Cell Biol, 2016, 18(4): 356-365. doi: 10.1038/ncb3330
[39] 李恬, 靳明明, 宋少莉, 等. 雷公藤甲素通过调控糖酵解途径抑制人肝癌SMMC-7721细胞的研究[J]. 世界中西医结合杂志, 2020, 15(6): 981-985, 990. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SJZX202006001.htm [40] YU L, LU M, JIA D, et al. Modeling the genetic regulation of cancer metabolism: interplay between glycolysis and oxidative phosphorylation[J]. Cancer Res, 2017, 77(7): 1564-1574. doi: 10.1158/0008-5472.CAN-16-2074
[41] VRIEND J, REITER R J. Melatonin and the von Hippel-Lindau/HIF-1 oxygen sensing mechanism: a review[J]. Biochim Biophys Acta, 2016, 1865(2): 176-183. http://smartsearch.nstl.gov.cn/paper_detail.html?id=19970b6385ccbb72c82e0946a785d254
[42] LIU J, ZHANG X, CHEN K, et al. CCR7 chemokine receptor-inducible lnc-Dpf3 restrains dendritic cell migration by inhibiting HIF-1α-mediated glycolysis[J]. Immunity, 2019, 50(3): 600-615, e15. doi: 10.1016/j.immuni.2019.01.021
[43] CIMMINO F, AVITABILE M, LASORSA V A, et al. HIF-1 transcription activity: HIF1A driven response in normoxia and in hypoxia[J]. BMC Med Genet, 2019, 20(1): 37. doi: 10.1186/s12881-019-0767-1
[44] SHI J, YE J, FEI H, et al. YWHAZ promotes ovarian cancer metastasis by modulating glycolysis[J]. Oncol Rep, 2019, 41(2): 1101-1112. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/30535456
[45] 宋玲, 付琼. 紫云英苷通过抑制HIF-1α诱导的糖酵解途径发挥抗卵巢肿细胞作用的研究[J]. 实用肿瘤学杂志, 2018, 32(6): 503-509. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-SYZL201806006.htm -
期刊类型引用(4)
1. 任慧云，冯一伟，许培英. 乌头碱调节C-C基序趋化因子配体2/C-C基序趋化因子受体2信号通路对膀胱癌细胞抗肿瘤活性及其作用机制研究. 安徽医药. 2024(04): 660-665+849 . 
百度学术
2. 张佳丽，易宏英，郝玲，李尚文，陈昶旭. 自拟排浊清宫汤配方颗粒联合米索前列醇片对产后宫内组织残留患者子宫复旧的影响. 实用临床医药杂志. 2024(04): 55-60 . 本站查看
3. 濮忠建，杨军，杨帆，王亚军. 基于长链非编码RNA HOX转录反义RNA探讨次乌头原碱对人肝癌SK-Hep-1细胞自噬的影响实验研究. 陕西医学杂志. 2024(06): 754-758+763 . 百度学术
4. 陈晓峥，程菊，石小艺，杨立苑，谢小冬. 乌头属二萜生物碱的抗肿瘤活性研究进展. 中国中药杂志. 2023(14): 3765-3773 . 百度学术
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