Analysis of phylogenetic typing, virulence genes and biofilm phenotype of uropathogenic Escherichia coli isolates
-
摘要:目的 分析尿道致病性大肠杆菌（UPEC）临床分离菌株的种系分型、毒力基因型及生物被膜形成能力。方法 采集临床尿路感染患者尿样进行细菌培养，对菌落计数大于105 CFU/mL的样品再进行挑选，将选出的疑似大肠杆菌的菌落用微生物及蛋白快速鉴定质谱仪（MALDI Biotyper）鉴定出UPEC分离株。利用多重聚合酶链反应（PCR）检测UPEC分离株种系分型基因chuA、yjaA以及DNA片段TSPE4.C2；利用PCR检测UPEC分离株中9种毒力基因（fimH、tonB、ireA、fyuA、cnf-1、vat、hlyD、ompR和phoU）的分布情况；通过结晶紫染色法定量检测UPEC分离株生物被膜形成能力。结果 共选取UPEC分离株42株，其种系分型以B2型和D型为主，分别占40.5%和31.0%。对9种毒力基因进行检测发现，Ⅰ型菌毛编码基因fimH检出率最高，为92.9%；摄铁相关基因tonB、ireA和fyuA的检出率分别为90.5%、66.7%和76.2%；受检的3种毒素相关基因中，编码细胞坏死因子的cnf-1基因检出率最高（52.4%），溶血素基因hlyD和空泡化毒素基因vat的检出率分别为21.4%和28.6%；其余毒力基因ompR和phoU的检出率均低于30.0%。所有受检菌株均能形成生物被膜，其中16株（占38.1%）具有强生物被膜形成能力，15株（占35.7%）具有中等生物被膜形成能力，其余11株菌株具有弱生物被膜形成能力。进一步分析发现，强生物被膜形成菌株大多属于B2型，且其携带毒力基因数量高于弱生物被膜菌株，差异有统计学意义（P < 0.05）。结论 UPEC临床分离株生物被膜形成能力与其种系分型和毒力基因分布具有一定关联性，进一步了解UPEC临床分离株的生物学特征尤其是生物被膜形成能力和毒力基因分布情况，可为尿路感染防控提供重要参考依据。Abstract:Objective To analyze phylogenetic typing, virulence genes and biofilm phenotype of isolated uropathogenic Escherichia coli(UPEC)strains.Methods Urine samples from patients with clinical urinary tract infection were collected for bacterial culture. The colonies with a colony number greater than 105 CFU/mL after bacterial culture in urine were collected and then subjected to bacterial isolation. The UPEC isolates from suspected Escherichia coli strains were identified by Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization technique (MALDI-Biotyper). Multiplex Polymerase Chain Reaction (PCR) was used to detect the phylogeny genes chuA, yjaA and DNA fragment TspE4.C2 of UPEC isolates. The distribution of nine virulence genes (fimH, tonB, ireA, fyuA, cnf-1, vat, hlyD, ompR and phoU) was detected by PCR. The biofilm formationability of UPEC isolates was quantitatively determined by crystal violet staining.Results A total of 42 UPEC isolates were selected, and the main phylogeny typing was B2 and D, accounting for 40.5% and 31.0%, respectively. Detection of nine virulence genes found that the fimH gene encoding type Ⅰ fimbriae had the highest detection rate (92.9%); the detection rate of iron-uptake related genes tonB, ireA and fyuA were 90.5%, 66.7% and 76.2%, respectively; among the three toxin-related genes, the detection rate of cnf-1 gene encoding cytotoxic necrosis factor was the highest (52.4%), was 21.4% for hemolysin encoding gene hlyD and 28.6% for vacuolating toxin gene vat; the detection rates of the other virulence genes such as ompR and phoU were lower than 30.0%. Our results showed that all the tested isolates could form biofilm, among which 16 isolates had strong biofilm formation ability (38.1%), 15 isolates had moderate biofilm formation ability (35.7%), and the remaining 11 strains had weak biofilm forming ability. Further analysis showed that the strong biofilm-forming strains mainly belonged to phylogenetic type B2, which possessed the higher numbers of virulence genes than that of the weak biofilm-forming strains (P < 0.05).Conclusion The biofilm formation ability of UPEC clinical isolates is correlated with the phylogenetic types and the distribution virulence genes. This study will help to understand the biological characteristics of UPEC clinical isolates, especially the biofilm formation ability and virulence gene distribution, and could provide important references for the prevention and control of urinary tract infection.
-
尿道致病性大肠杆菌(UPEC)是尿路感染最主要的致病菌，能够造成80%~90%的社区感染和30%~50%的医源性感染[1-2]。UPEC感染机制复杂，能够利用一系列毒力因子发挥致病性，常见的毒力因子有黏附素、铁摄取系统、细胞毒素以及毒力岛等。UPEC借助这些毒力因子黏附并定植于宿主细胞，在尿道及其他肠道外环境中存活繁殖，分泌细胞毒素损伤宿主细胞，导致尿道感染等多种肠道外感染[3-5]。此外, UPEC生物被膜形成能力在感染过程中也发挥着重要作用[6]。生物被膜是细菌黏附于介质表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂质蛋白等成分，包裹菌体形成的大量细菌聚集膜样物[7]。生物被膜是细菌为适应宿主内环境而采取的一种生存策略，能够阻断机体分泌的抗菌肽、抗生素以及免疫细胞对细菌的杀伤作用。生物被膜中也存在着一些抗生素灭活酶如β-内酰胺酶，从而增强了细菌的耐药性。了解UPEC临床分离株的生物被膜形成能力以及毒力基因分布情况，对于明确菌株致病力进而采取有效防控措施具有重要意义。本研究检测UPEC临床分离株的种系分型、毒力基因分布及生物被膜形成能力，并分析三者间的关联性，旨在为UPEC分子流行病学特点、致病机制的研究以及临床防控措施的制订提供参考。
1. 材料与方法
1.1 菌株来源
采集2019年10月—2020年11月扬州大学临床医学院收治的临床尿路感染患者的尿样进行细菌培养，对菌落计数>105 CFU/mL的样品再进行挑选，挑取疑似大肠杆菌的粉红色菌落进行质谱检测，经微生物及蛋白快速鉴定质谱仪(MALDI Biotyper)鉴定出UPEC分离株。
1.2 试剂与耗材
聚合酶链反应(PCR)预混液(2×Taq PCR Master Mix-Vazyme), 100 bp DNA标记物(100 bp DNA Marker-TakaRa), 西班牙琼脂糖(Biowest); 乙二胺四乙酸(EDTA)、结晶紫、麦康凯培养基、胰酶大豆肉汤(TSB)培养基、聚苯乙烯96孔板，购自上海国药集团化学试剂有限公司。
1.3 PCR引物
参考ZHAO L X等[8]研究设计，分别设计大肠杆菌种系分型和毒力基因检测引物(由上海生工生物工程有限公司合成)，见表 1。
表 1 PCR扩增基因引物信息引物名称 引物序列(5′-3′) 片段大小/bp 目的基因 种系分型 chuA-F GACGAACCAACGGTCAGGAT 279 chuA chuA-R TGCCGCCAGTACCAAAGACA yjaA-F TGAAGTGTCAGGAGACGCTG 211 yjaA yjaA-R ATGGAGAATGCGTTCCTCAAC TspE4.C2-F GAGTAATGTCGGGGCATTCA 152 TspE4.C2 TspE4.C2-R CGCGCCAACAAAGTATTACG 毒力基因 fimH-F TCGAGAACGGATAAGCCGTGG 508 fimH fimH-R GCAGTCACCTGCCCTCCGGTA tonB-F AGCCGATTTCTGTCACGA 360 tonB tonB-R GATACTGCGGCTGATTAC ireA-F GATGACTCAGCCACGGGTAA 254 ireA ireA-R CCAGGACTCACCTCACGAAT fyuA-F TGATTAACCCCGCGACGGGAA 787 fyuA fyuA-R CGCAGTAGGCACGATGTTGTA cnf-F ATCTTATACTGGATGGGATCATCTTGG 1 105 cnf-1 cnf-R GCAGAACGACGTTCTTCATAAGTATC vat-F GTTGGTGGCAACAATCCT 549 vat vat-R ATACAGCTGAATGCCTTC hlyD-F CTCCGGTACGTGAAAAGGAC 904 hlyD hlyD-R GCCCTGATTACTGAAGCCTG ompR-F AAGGCTTCCAGGTTCGAA 441 ompR ompR-R TGACCAGTGCCTTCAGTA phoU-F GAGCAGCAGCTTTCTGAT 610 phoU phoU-R CTGCCAGCAGTTTATCGA 1.4 种系分型检测
利用多重PCR方法检测UPEC分离株的chuA、yjaA基因以及DNA片段TspE4.C2, 根据三者的检测结果判定分离株的种系分型[9]。种系分型标准: chuA(+)、yjaA(+)和TspE4.C2(+/-)菌株属于B2型; chuA(+)、yjaA(-)和TspE4.C2(+/-)属于D型; chuA(-)、yjaA(+/-)和TspE4.C2(+)属于B1型; chuA(-)、yjaA(+/-)和TspE4.C2(-)属于A型。
1.5 毒力基因检测
利用PCR对UPEC分离株的9个毒力基因进行检测，引物序列见表 1。PCR反应体系: 2×Taq Mix PCR反应液12.5 μL, 0.2 mmol/L上下游引物各1 μL, 菌液模板2 μL, 最后补加灭菌超纯水至25 μL终体积，混匀后进行PCR扩增。PCR反应条件: 94 ℃预变性4 min; 94 ℃ 1 min, 55 ℃ 1 min, 72 ℃ 1 min, 25个循环; 72 ℃ 10 min。各取10 μL PCR产物在1.5%琼脂糖凝胶中90 V电压下电泳1 h, 于紫外光下观察结果。
1.6 生物被膜检测
参考JAVED S等[9]和夏乐[10]的结晶紫染色生物被膜检测方法，挑取各菌株单菌落至LB液体培养基过夜振荡培养，次日取100 μL母液加至10 mL LB液体培养基中，转速220转/min, 37 ℃温度下振摇培养至600 nm波长处光密度(OD)值约为0.2。于96孔培养板中每孔加入200 μL菌液，每株菌株重复3个样，放入37 ℃培养箱中静置培养48 h后，小心弃去培养液，用磷酸盐缓冲液(PBS)清洗掉浮游菌，自然风干，加入0.1%结晶紫染液室温染色30 min, PBS清洗自然风干后加入95%酒精200 μL脱色10 min, 脱色液用酶标仪测定595 nm处OD值。孔中加入200 μL培养基作为阴性对照。
生物被膜形成能力判定标准: 将阴性对照平均OD值加上其3倍的标准差定义为临界值ODc。以临界值ODc为基准，菌株生物被膜可以分成无形成能力(-)(OD值≤ODc)、弱形成能力(+)(OD值>ODc~2 ODc)、中等形成能力(++)(OD值>2 ODc~4 ODc)和强形成能力(+++)(OD值>4 ODc)。
2. 结果
2.1 UPEC的分离鉴定结果
采集182例有泌尿系统感染症状患者的尿样，取10 μL无菌涂布于麦康凯培养基中进行细菌培养, 24 h后进行细菌计数。结果显示, 61例患者尿样的细菌计数≥105 CFU/mL, 说明存在尿路细菌感染。挑取麦康凯培养基上疑似大肠杆菌的粉红色菌落进行质谱检测，经鉴定共获得42株UPEC分离株。
2.2 种系分型检测结果
按照大肠杆菌种系分型鉴定方法，利用PCR检测chuA、yiaA和TspE4.C2在UPEC分离株中的分布情况，根据3种基因的分布组合确定菌株的种系分型。结果显示, UPEC分离株种系分型以B2型为主(占40.5%), 其次为D型(占31.0%), 而B1型和A型分别占16.7%和11.9%, 见表 2。
表 2 42株UPEC分离株种系分型检测结果[n(%)]种系分型 UPEC分离株 chuA yiaA TSPE4.C2 A型 5(11.9) - +/- - B1型 7(16.7) - +/- + B2型 17(40.5) + + +/- D型 13(31.0) + - +/- n为菌株计数。 2.3 毒力基因检测结果
42株UPEC分离株的9种毒力基因检测结果显示, 92.9%的分离株携带Ⅰ型菌毛编码基因fimH基因，分别有90.5%、66.7%和76.2%的分离株携带tonB、ireA和fyuA基因; 在受检的3种毒素相关基因中，编码细胞坏死因子的cnf-1基因检出率最高(52.4%), 溶血素基因hlyD和空泡化毒素基因vat的检出率分别为21.4%和28.6%; 其余毒力基因ompR和phoU的检出率均低于30.0%。对42株UPEC分离株的毒力基因携带数量进行分析发现, 9株菌株携带6种以上毒力基因(其中4株菌株同时携带8种毒力基因), 5株菌株携带毒力基因数量少于3种，其余28株菌株携带的毒力基因数量为3~6种，表明所分离的UPEC菌株携带毒力基因数量普遍较多，提示临床分离株的致病性较强，见表 3。
表 3 42株UPEC分离株中毒力基因检出结果毒力基因 阳性 n 占比/% fimH 39 92.9 tonB 38 90.5 ireA 28 66.7 fyuA 32 76.2 cnf-1 22 52.4 vat 12 28.6 hlyD 9 21.4 ompR 11 26.2 phoU 8 19.0 n为菌株计数。 2.4 生物被膜检测结果
通过结晶紫染色法对UPEC生物被膜形成能力进行定量分析，测定OD595 nm值反映菌株生物被膜形成能力。结果显示，所有受检菌株均能生成生物被膜，其中生物被膜具有强形成能力(+++)的菌株有16株(占38.1%), 生物被膜具有中等形成能力(++)的菌株有15株(占35.7%), 生物被膜具有弱形成能力(+)的菌株有11株(占26.2%)。
2.5 生物被膜形成能力与种系分型之间的关系
进一步分析UPEC分离株生物被膜形成能力与其种系分型之间的关联发现，大多数B2型和D型菌株都具有强或中等生物被膜形成能力，而B1型和A型菌株主要表现为弱生物被膜形成能力，表明UPEC菌株的生物被膜形成能力与其种系分型存在一定关联，见表 4。
表 4 UPEC不同种系分型菌株的生物被膜形成分布情况生物被膜形成能力 种系分型 A型(n=5) B1型(n=7) B2型(n=17) D型(n=13) 强 0 0 11(64.7) 5(38.5) 中等 1(20.0) 2(28.6) 6(35.3) 6(46.2) 弱 4(80.0) 5(71.4) 0 2(15.3) 2.6 生物被膜形成与毒力基因型之间的关系
UPEC强生物被膜形成能力菌株所携带的毒力基因数量大多在5种以上，而弱生物被膜形成能力菌株所携带的毒力基因数量一般低于4种。强生物被膜形成能力菌株中fimH、tonB和ireA基因的检出率高于弱生物被膜形成能力菌，差异有统计学意义(P < 0.05), 提示这些毒力基因在生物被膜形成过程中发挥着重要作用，见图 1。
3. 讨论
UPEC引起的尿道感染是临床最常见的细菌性疾病之一，严重威胁患者健康。不同基因型、血清型以及毒力型的UPEC菌株分布广泛，造成复杂的临床病型，增加了防治难度。UPEC的致病作用很大程度上依赖于其携带的毒力因子，如黏附素、摄铁系统、外毒素和生物被膜等。这些毒力因子协助UPEC定植黏附、入侵宿主细胞，抵抗压力应激、免疫逃逸，造成组织细胞损伤，从而引发尿道感染[11]。及时有效的治疗对于控制尿道感染至关重要，但前提是充分了解UPEC临床菌株的生物学特征，如基因型、毒力基因分布和生物被膜形成能力等。
种系分型是肠道外大肠杆菌分子流行病学的重要特征，根据TspE4.C2、yjaA、chuA这3个基因的不同组合，可以将大肠杆菌分为A型、B1型、B2型和D型这4个种系分型。chuA编码外膜血红素受体，参与血红素转运; yjaA编码基因负责细胞对过氧化氢和酸应激反应; TspE4.C2编码脂肪酶酯酶。EWERS C等[12]和张德宝[13]分析不同来源的UPEC菌株种系分型发现, 61.5%和21.5%的菌株分别属于B2和D型。RODRIGUEZ-SIEK K E等[14]分离的200株UPEC中, 130株为B2型, 37株为D型。本研究42株UPEC分离株中, B2和D型分离株分别为17株和13株，合计占分离株总数的71.4%, 与国外报道[12, 14]结论一致，表明不同地区、不同来源的UPEC分离株的种系分型均以B2型和D型为主。
本研究检测了9种与UPEC致病性密切相关的毒力基因，这些毒力基因对UPEC在泌尿道的定植和感染中起着重要作用。检测结果显示，几乎所有UPEC分离株(90%以上)都携带黏附素基因fimH和摄铁相关基因tonB, 提示黏附定植和铁摄取在UPEC抵御尿液冲刷以及适应尿液贫铁内环境至关重要; 其他毒力基因如铁载体ireA(66.7%)、耶尔森毒力岛基因fyuA(76.2%)和毒素相关基因cnf-1(52.4%)的检出率也相对较高，表明UPEC临床分离株毒力基因分布较广，具有较强的致病性。
UPEC的生物被膜形成能力与其引发的尿道感染密切相关。UPEC形成生物被膜后可黏附于泌尿道上皮细胞或导尿管壁，在分泌的多糖基质、蛋白的保护下，抵御抗菌药物和免疫细胞的杀伤作用。本研究中所有受检菌株均能生成生物被膜，但形成能力强弱有所差异，其中大多数强生物被膜形成能力菌株属于B2型。强生物被膜形成能力菌株所携带的毒力基因数量多于弱生物被膜形成能力菌株，且fimH、tonB和ireA基因的检出率显著高于弱生物被膜形成能力菌株，提示这些毒力基因在生物被膜形成过程中发挥着重要作用。菌株的强生物被膜形成能力可能与其携带强毒力岛以及表达更多的毒力基因有关，如黏附素、表面亲水性蛋白、铁摄取复合物以及外毒素。另外, B2型菌株也是造成持续性尿路感染最常见的毒力克隆群，这可能与其具有较强的生物被膜形成能力有关。
综上所述, UPEC临床分离株生物被膜形成能力与其种系分型和毒力基因分布具有一定关联性，这可以为更好地理解生物被膜形成和开发针对性治疗方法提供参考。
-
表 1 PCR扩增基因引物信息
引物名称 引物序列(5′-3′) 片段大小/bp 目的基因 种系分型 chuA-F GACGAACCAACGGTCAGGAT 279 chuA chuA-R TGCCGCCAGTACCAAAGACA yjaA-F TGAAGTGTCAGGAGACGCTG 211 yjaA yjaA-R ATGGAGAATGCGTTCCTCAAC TspE4.C2-F GAGTAATGTCGGGGCATTCA 152 TspE4.C2 TspE4.C2-R CGCGCCAACAAAGTATTACG 毒力基因 fimH-F TCGAGAACGGATAAGCCGTGG 508 fimH fimH-R GCAGTCACCTGCCCTCCGGTA tonB-F AGCCGATTTCTGTCACGA 360 tonB tonB-R GATACTGCGGCTGATTAC ireA-F GATGACTCAGCCACGGGTAA 254 ireA ireA-R CCAGGACTCACCTCACGAAT fyuA-F TGATTAACCCCGCGACGGGAA 787 fyuA fyuA-R CGCAGTAGGCACGATGTTGTA cnf-F ATCTTATACTGGATGGGATCATCTTGG 1 105 cnf-1 cnf-R GCAGAACGACGTTCTTCATAAGTATC vat-F GTTGGTGGCAACAATCCT 549 vat vat-R ATACAGCTGAATGCCTTC hlyD-F CTCCGGTACGTGAAAAGGAC 904 hlyD hlyD-R GCCCTGATTACTGAAGCCTG ompR-F AAGGCTTCCAGGTTCGAA 441 ompR ompR-R TGACCAGTGCCTTCAGTA phoU-F GAGCAGCAGCTTTCTGAT 610 phoU phoU-R CTGCCAGCAGTTTATCGA 
下载: 导出CSV
表 2 42株UPEC分离株种系分型检测结果[n(%)]
种系分型 UPEC分离株 chuA yiaA TSPE4.C2 A型 5(11.9) - +/- - B1型 7(16.7) - +/- + B2型 17(40.5) + + +/- D型 13(31.0) + - +/- n为菌株计数。
下载: 导出CSV
表 3 42株UPEC分离株中毒力基因检出结果
毒力基因 阳性 n 占比/% fimH 39 92.9 tonB 38 90.5 ireA 28 66.7 fyuA 32 76.2 cnf-1 22 52.4 vat 12 28.6 hlyD 9 21.4 ompR 11 26.2 phoU 8 19.0 n为菌株计数。
下载: 导出CSV
表 4 UPEC不同种系分型菌株的生物被膜形成分布情况
生物被膜形成能力 种系分型 A型(n=5) B1型(n=7) B2型(n=17) D型(n=13) 强 0 0 11(64.7) 5(38.5) 中等 1(20.0) 2(28.6) 6(35.3) 6(46.2) 弱 4(80.0) 5(71.4) 0 2(15.3)
下载: 导出CSV
-
[1] MODGIL V, KAUR H, MOHAN B, et al. Molecular, phylogenetic and antibiotic resistance analysis of enteroaggregative Escherichia coli/uropathogenic Escherichia coli hybrid genotypes causing urinary tract infections[J]. Indian J Med Microbiol, 2020, 38: 421-429. doi: 10.4103/ijmm.IJMM_20_365
[2] 董敏, 郑书发, 余斐, 等. 尿道致病性大肠埃希菌克隆株毒力和耐药性的研究[J]. 中华检验医学杂志, 2014, 37(7): 531-534. doi: 10.3760/cma.j.issn.1009-9158.2014.07.013 [3] 赵李祥. 禽病原性大肠杆菌与尿道致病性大肠杆菌毒力基因相关性与体内外表达差异及其ftsk突变株的研究[D]. 扬州: 扬州大学, 2008. [4] FOXMAN B. The epidemiology of urinary tract infection[J]. Nat Rev Urol, 2010, 7(12): 653-660. doi: 10.1038/nrurol.2010.190
[5] TEWAWONG N, KOWABOOT S, PIMAINOG Y, et al. Distribution of phylogenetic groups, adhesin genes, biofilm formation, and antimicrobial resistance of uropathogenic Escherichia coli isolated from hospitalized patients in Thailand[J]. PeerJ, 2020, 8: e10453. doi: 10.7717/peerj.10453
[6] VU B, CHEN M, CRAWFORD R J, et al. Bacterial extracellular polysaccharides involved in biofilm formation[J]. Molecules, 2009, 14(7): 2535. doi: 10.3390/molecules14072535
[7] MANDAKHALIKAR K D, RAHMAT J N, CHIONG E, et al. Extraction and quantification of biofilm bacteria: method optimized for urinary catheters[J]. Sci Rep, 2018, 8(1): 8069. doi: 10.1038/s41598-018-26342-3
[8] ZHAO L X, GAO S, HUAN H X, et al. Comparison of virulence factors and expression of specific genes between uropathogenic Escherichia coli and avian pathogenic E. coli in a murine urinary tract infection model and a chicken challenge model[J]. Microbiol Read Engl, 2009, 155(Pt 5): 1634-1644.
[9] JAVED S, MIRANI Z A, PIRZADA Z A. Phylogenetic group B2 expressed significant biofilm formation among drug resistant uropathogenic Escherichia coli[J]. Libyan J Med, 2021, 16(1): 1845444. doi: 10.1080/19932820.2020.1845444
[10] 夏乐. 禽致病性大肠杆菌E058株在鸡感染模型中的转录组学分析及sodA基因功能和致病性评价[D]. 扬州: 扬州大学, 2017. [11] GONZALES-RODRIGUEZ A O, INFANTE VARILLAS S F, BARRÓN PASTOR H J, et al. Immunological and biochemical response of older adults with urinary tract infection to uropathogenic Esherichia coli virulence factors[J]. Revista Peruana De Med Exp Y Salud Publica, 2020, 37(3): 527-531. doi: 10.17843/rpmesp.2020.373.4918
[12] EWERS C, LI G W, WILKING H, et al. Avian pathogenic, uropathogenic, and newborn meningitis-causing Escherichia coli: how closely related are they[J]. Int J Med Microbiol, 2007, 297(3): 163-176. doi: 10.1016/j.ijmm.2007.01.003
[13] 张德宝. 江苏省部分地区尿道致病性大肠杆菌(UPEC)分子流行病学调查与致病性研究[D]. 扬州: 扬州大学, 2013. [14] RODRIGUEZ-SIEK K E, GIDDINGS C W, DOETKOTT C, et al. Comparison of Escherichia coli isolates implicated in human urinary tract infection and avian colibacillosis[J]. Microbiol Read Engl, 2005, 151(Pt 6): 2097-2110.
-
期刊类型引用(4)
1. 陶梦珂，李苗苗，石晴晴，赵恒，张鲁星，胡功政，潘玉善，刘建华. 鸡源大肠杆菌生物被膜形成与耐药性、毒力基因的关联性分析. 畜牧与兽医. 2024(06): 86-93 . 
百度学术
2. 高远，袁志浩，王永鑫，辛文成，乔保平. 八宝丹胶囊预防导尿管相关性尿路感染的效果. 郑州大学学报(医学版). 2024(05): 701-703 . 百度学术
3. 林秀慧，许政衡，林秀华，王诗佳，张娇珍. 老年导尿管相关尿路感染生物被膜菌分布特征及生物被膜形成相关基因. 中华医院感染学杂志. 2023(05): 718-722 . 百度学术
4. 袁杭海，马志芳，唐补生，郭华伟，张海春，丁一波. 尿路感染的现代研究和中医治疗进展. 河北中医. 2023(07): 1199-1202 . 百度学术
其他类型引用(2)
计量
- 文章访问数: 337
- HTML全文浏览量: 167
- PDF下载量: 19
- 被引次数: 6
苏公网安备 32100302010246号