Application of self-made pressure-wrapped airbag vest in elderly patients after pacemaker implantation
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摘要:目的 探讨自制加压包扎气囊式背心应用于起搏器植入术对老年患者并发症和护理舒适度的影响。方法 选择首次接受永久性起搏器植入术的老年患者100例为研究对象，采用随机数表法分为对照组和观察组，每组50例，对照组采用沙袋联合弹力绷带压迫法，观察组采用自制加压包扎气囊式背心。比较2组术后干预8 h视觉模拟评分法(VAS)评分，囊袋血肿、皮下瘀血、术肢肿胀以及压迫袋移位发生率，术后24 h电极移位、皮肤水泡或感染发生率，首次下床活动时间、便秘、腰背部疼痛和舒适度量表评分。结果 观察组VAS评分低于对照组，囊袋血肿、皮下瘀血、术肢肿胀以及压迫袋移位发生率低于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)。观察组皮肤水泡或感染发生率低于对照组，首次下床活动时间缩短，便秘和腰背痛发生率低于对照组，舒适度量表评分高于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05)。结论 气囊式背心相较于沙袋联合弹力绷带压迫法可减轻老年患者起搏器植入术后疼痛，减少多种并发症，促进早期下床活动，提高护理舒适度。
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关键词:
- 气囊式背心 /
- 沙袋联合弹力绷带压迫法 /
- 起搏器植入术 /
- 老年患者 /
- 术后疼痛
Abstract:Objective To investigate the effect of self-made pressure-wrapped airbag vest on complications and nursing comfort level in elderly patients after pacemaker implantation.Methods A total of 100 elderly patients received permanent pacemaker implantation for the first time were selected as study objects and randomly divided into control group and observation group, with 50 cases in each group. The control group was given sandbag and elastic bandage compression method, and the observation group was treated with self-made pressure-wrapped airbag vest. The score of Visual Analogue Scale (VAS) at 8 h after intervention, the incidence rates of sac hematoma, subcutaneous blood stasis, limb swelling and compression bag displacement, the incidence rates of electrode displacement, skin blister or infection at 24 h after operation, the first time to bed-off activity, constipation, low back pain and score of comfort scale were compared between the two groups.Results The VAS score and incidence rates of sac hematoma, subcutaneous blood stasis, limb swelling and compression bag displacement in the observation group were significantly lower than those in the control group (P < 0.05). The incidence rate of skin blister or infection, the first time to bed-off activity and incidence rates of constipation and low back pain in the observation group were significantly lower and shorter than those in the control group, while the score of comfort scale was significantly higher than that in the control group (P < 0.05).Conclusion Compared with sandbag and elastic bandage compression method, airbag vest can reduce the pain of elderly patients after pacemaker implantation, reduce a variety of complications, promote early bed-off activities and increase nursing comfort level. -
宫颈癌(CC)是女性常见肿瘤，是女性肿瘤相关死亡的主要原因之一[1-2], 早期CC的5年生存率为99%, 但远处转移患者的5年生存率仅为24%[3]。相同TNM分期的CC患者使用相同的放化疗，依然会有患者发生肿瘤转移或复发[4-5], 因此目前仍然很难准确预测每例患者的治疗结果。越来越多的证据[6-7]表明，肿瘤与微小RNA(miRNA)之间存在相关性。miRNA是由17~24个核苷酸组成的短链RNA。据报道[8-9], miRNA通过与其靶标mRNA的3'UTR直接碱基配对发挥关键调节作用，有助于抑制mRNA的表达。研究[10]表明, miRNA与癌细胞的细胞分化和增殖等生物学过程有关，导致越来越多的研究侧重于靶向miRNA以提高CC治疗疗效。WANG T等[11]发现, miR-129-5p可通过与E-cadherin、波形蛋白和微球蛋白结合抑制肺癌细胞侵袭和增殖。据报道[12-13], miR-495通过靶向结直肠癌中的FAM83D来抑制细胞增殖和迁移, miR-320a通过靶向c-Myc抑制人肝细胞癌肿瘤的增殖和侵袭, miR-491在不同人类肿瘤中异常表达。研究表明, TPX2与CC、结肠癌等多种癌症的发生发展密切相关。王庆亮等[14]研究显示, TPX2在肺腺癌中呈差异表达，能够调控肿瘤进程。马玉花等[15]研究显示, TPX2在CC进程中同样扮演重要角色。研究[16]显示, TPX2在有丝分裂纺锤体形成中具有重要功能。本研究探讨miR-491及TPX2在CC细胞增殖、侵袭及迁移中的作用及分子机制，为CC的早起筛查生物标志物和靶向治疗提供依据。
1. 资料与方法
1.1 人体组织和细胞培养
收集2018年1月-2020年12月海南省海口市妇幼保健院CC患者的58对癌组织及癌旁组织标本(距离肿瘤>5 cm)。见表 1。本研究采用观察性研究方法对目标分子的表达进行检测，进一步采用干预性研究(体外细胞实验和体内动物实验)探讨miR-491和TPX2在CC中的作用。纳入标准: 经2名及以上病理学专家对患者肿瘤类型确认的患者; 无其他恶性疾病的患者; 依从性较好的患者。排除同时患有其他恶性疾病的患者和依从性较差的患者。本研究所有患者均未接受过任何治疗，所有组织样本术后立即在液氮中速冻，以进行进一步分析。本研究经医院伦理委员会批准，所有参与者均签署知情同意书。人CC细胞系Hela、C-33A、Siha和HT-3细胞均购自美国典型培养物保藏中心(Manassas, 美国)，其中HcerEpic细胞作为宫颈上皮细胞的对照用于目标分子表达分析。本研究涉及的细胞均保存在Dulbecco改良Eagle培养基中(DMEM, 美国)，其中含有10% 的胎牛血清(FBS, 美国)并置于37 ℃、5% CO2的培养环境中培养。
表 1 临床样本信息特征 miR-491表达情况 P 低表达(n=41) 高表达(n=17) 性别 男 23 9 0.825 9 女 18 8 年龄/岁 < 60 22 9 0.960 2 ≥60 19 8 TNM分期 Ⅰ~Ⅱ期 21 11 0.347 2 Ⅲ~Ⅳ期 20 6 T分期 T1~T2期 9 10 0.006 5 T3~T4期 32 7 淋巴结转移 无 33 9 0.032 6 有 8 8 1.2 细胞转染
本研究将Hela和HT-3细胞分别随机分为5组，包括NC组[磷酸盐缓冲液(PBS)处理]、miR-491组(过表达miR-491处理)、si-TPX2组(抑制TPX2)、TPX2组(TPX2过表达)及miR-491+TPX2组(同时过表达miR-491和TPX2), 其中miR-491模拟物、miR-491抑制剂、TPX2 siRNA和相应的对照均从RiBoBio(中国广州)获得。根据说明将Lipofectamine 2000(Invitrogen, 美国)瞬时转染到Hela细胞中，转染48 h后，收集细胞用于进一步研究。
1.3 实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)
CC或正常组织样品和细胞系中的总RNA由TRIzol试剂(Invitrogen, 美国)按照制造商的方案制备。然后，使用Prime Script RT试剂盒(TaKaRa, 中国)合成cDNA。miR-491和TPX2的qRT-PCR分析使用TaqMan MicroRNA Assay Kit(Applied Biosystems, 美国)和SYBRⓇ Premix Ex TagTMⅡ(TaKaRa, 中国)，在ABI 7500 Real-Time PCR系统(Applied Biosystems, 美国)进行检测。PCR条件为95 ℃ 30 s、95 ℃ 5 s和60 ℃ 34 s共40个循环。GAPDH和U6分别作为TPX2和miR-491的内参基因。基因的相对表达量采用2-ΔΔCT法进行评价。本研究涉及的引物序列见表 2。
表 2 各基因引物序列情况基因名称 引物 序列 miR-491 上游 5′- ACACTCCAGCTGGGAGTGGGGAACCCTT-3′ 下游 5′-TGGTGTCGTGGAGTCG-3′ TPX2 上游 5′- ACCTTGCCCTACTAAGATT-3′ 下游 5′- AATGTGGCACAGGTTGAGC-3′ U6 上游 CTCGCTTCGGCAGCACA 下游 AACGCTTCACGAATTTGCGT GADPH 上游 5′- GGGTGTGAACCACGAGAAAT-3′ 下游 5′-ACTGTGGTCATGAGCCCTTC -3′ 1.4 蛋白质印迹法
转染后72 h后，收集Hela细胞，并通过放射免疫沉淀分析(RIPA)缓冲液(Beyotime Biotechnology, 中国)制备总蛋白。然后，通过二辛可宁酸(CCA)蛋白质测定试剂盒(Beyotime Biotechnology，中国上海)测量蛋白质浓度。随后，蛋白质样品通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，然后转移至聚偏二氟乙烯(PVDF)膜(Millipore, 美国)上，该膜在Tris缓冲盐水和吐温中封闭，采用5%脱脂奶粉浸泡2 h, 将膜与一抗在4 ℃下孵育过夜。之后采用TBST清洗，然后在室温下进行二抗孵育2 h。该检测中涉及的一抗包括抗TPX2(1∶ 1 000; ab71816)、抗GAPDH(1∶ 1 000; ab9485), 二抗是抗兔IgG(1∶ 4 000; ab150077)。采用化学发光检测系统(Beyotime, 中国)测量蛋白质水平，内参蛋白为GAPDH。
1.5 细胞侵袭检测
用miR-491模拟物、抑制剂或TPX2 siRNA处理后，将Hela细胞系接种在上室中。对于侵袭和迁移测定, transwell室分别用或不用基质胶(BD Biosciences, 美国)进行预处理。当底部小室含有含FBS的DMEM培养基时，顶部小室含有无血清培养基。37 ℃培养48 h后，用棉签清除留在上表面的细胞。同时，将黏附在底部表面的那些用4%的甲醛固定并用0.1%的结晶紫染色以使用显微镜(Olympus Corporation, 日本)检测图像。
1.6 双荧光素酶报告基因检测
将含有miR-491靶位点的扩增 TPX2 野生型或突变型3′UTR插入pMIR-GLO荧光素酶报告载体(Ambion, 美国)。然后，根据制造商提供的方案，使用Lipofectamine 2000(Invitrogen, 美国)将 TPX2 基因的野生型或突变型3′UTR的miR-491模拟物和荧光素酶报告载体转染到Hela细胞中。采用双荧光素酶报告基因检测系统(Promega, 美国)检测转染后48 h Hela细胞的荧光素酶活性。
1.7 裸鼠成瘤实验
取Slaccas(中国上海)的20只BALB/c裸鼠(体质量17~22 g, 4~5周龄)随机分为4组(NC组、miR-491组、TPX2组及miR-491+TPX2组)，每组5只。将Hela细胞悬浮液(每0.1 mL有1×107个细胞)皮下注射到小鼠的腋窝，饲养30 d后处死所有小鼠，切除肿瘤块并称重。
1.8 统计学分析
本研究所有数据表示为平均值±标准偏差。采用SPSS 22.0软件对数据进行处理，组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析(ANOVA), 采用SNK法进行进一步组间比较。检验水准α为0.05, P<0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 CC组织和癌旁组织中miR-491和 TPX2 的表达情况
为了证实miR-491在CC细胞中的作用，本研究检测了miR-491在CC组织和细胞系中的表达。qRT-PCR结果表明，与癌旁组织比较, CC组织中的miR-491表达下降，见图 1A。此外，为了证实CC组织中miR-491的表达下调，本研究进一步采用qRT-PCR检测了CC细胞中miR-491的表达，结果表明，与HcerEpic细胞比较, miR-491的表达降低，见图 1B。此外，本研究在CC细胞系中检测了 TPX2表达水平。qRT-PCR分析显示, CC细胞中 TPX2的mRNA水平高于正常细胞，见图 1C。此外, Spearman相关分析显示, miR-491与 TPX2表达呈负相关，见图 1D。
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图 1 CC组织和癌旁组织中miR-491和TPX2的表达情况A: qRT-PCR检测CC组织中miR-491的表达情况; B: qRT-PCR检测CC细胞系中miR-491的表达情况; C: qRT-PCR检测TPX2 mRNA在CC组织中的表达情况; D: miR-491和TPX2 mRNA的表达的相关性分析。2.2 miR-491对CC细胞增殖的作用
首先，将miR-491模拟物转染到CC细胞系中，并通过qRT-PCR确认其效率。结果显示，采用miR-491模拟物处理的CC细胞系中的miR-491表达上调，见图 2A。细胞活力检测显示，与NC组比较，采用miR-491模拟物处理的细胞Hela和HT-3细胞的增殖能力降低，见图 2B。此外，以上结果在克隆形成实验中同样得到了验证，见图 2C。
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图 2 miR-491对细胞增殖能力的影响A: qRT-PCR验证各组miR-491的表达情况; B: CCK-8检测验证miR-491对细胞增殖的影响; C: 克隆形成实验验证miR-491对细胞增殖的影响。与NC组比较, *P<0.05, **P<0.01。2.3 miR-491通过靶向TPX2发挥生物学作用
进一步检测CC细胞系中TPX2的表达发现，与NC组比较, CC细胞系中的TPX2的表达升高(图 3A、3B)。结合相关性分析结果，本研究采用含有TPX2-3′UTR-WT或TPX2-3′UTR-MUT的荧光素酶报告载体以及miR-491模拟物共转染验证其靶向性的结果表明，与NC组比较, miR-491模拟物可以降低PmirGLO-TPX2-3′UTR WT的荧光素酶活性(图 3C), 但PmirGLO-TPX2-3′UTR MUT的荧光素酶活性未受到miR-491模拟物的影响，表明miR-491直接与 TPX2 3′UTR结合。
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图 3 miR-491与TPX2的靶向关系验证A: qRT-PCR验证TPX2的表达情况; B: TPX2在细胞中的蛋白表达情况; C: 双荧光素酶报告实验验证miR-491与TPX2的靶向关系。本研究同时采用Hela和HT-3 2种细胞系验证miR-491和TPX2对肿瘤细胞侵袭和迁移能力的影响。结果显示，与NC组比较, miR-491组和si-TPX2组的TPX2表达被抑制，而TPX2组的TPX2的表达增高(图 4A、4B和图 5A、5B)。细胞活力和凋亡检测结果发现, miR-491能够通过调控TPX2显著抑制细胞增殖且增高细胞凋亡率(图 4C、4D, 图 5C、5D)。划痕和transwell检测发现，过表达的miR-491抑制细胞迁移和侵袭，而过表达的TPX2能够促进细胞迁移和侵袭。此外，这种作用被miR-491的过表达所逆转(图 4E、4F, 图 5E、5F)。
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图 4 miR-491通过TPX2调控Hela细胞的增殖、迁移及侵袭A、B: 验证各组TPX2的表达情况; C: CCK-8检测各组细胞活力; D: 流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况; E: 划痕实验验证各组细胞迁移情况; F: transwell实验验证各组细胞侵袭能力。![]()
图 5 miR-491通过TPX2调控HT-3细胞的增殖、迁移及侵袭A、B: 验证各组TPX2的表达情况; C: CCK-8检测各组细胞活力; D: 流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况; E: 划痕实验验证各组细胞迁移情况; F: traswell实验验证各组细胞侵袭能力情况。2.4 体内实验验证miR-491及TPX2对肿瘤生长的影响
从肿瘤体积和质量的检测结果发现，与NC组比较, miR-491能够抑制肿瘤生长，而过表达TPX2能够促进肿瘤生长，且这种促进作用被miR-491所逆转(图 6A、6B、6C)。对肿瘤组织进行进一步的苏木精-伊红染色(HE)后发现, miR-491组的肿瘤组织出现部分坏死现象，而TPX2组肿瘤细胞增殖作用明显(图 6D)。
3. 讨论
CC是全球女性肿瘤死亡的主要原因之一，防止肿瘤生长和转移是CC治疗的核心问题[17]。miRNAs被认为在癌症发展中具有关键功能，因为miRNAs在肿瘤中的表达不同于正常组织，并且miRNAs可能在肿瘤中具有独特调节作用[18]。目前研究[19-20]显示, miR-491与多种肿瘤的发生有关，其在结直肠癌、胃癌和肝细胞癌中均有报道。本研究探讨miR-491在CC细胞中的功能，结果显示miR-491在CC细胞中下调。因此, miR-491在肿瘤发展中起着重要作用。
TPX2是一种微管相关蛋白，越来越多的研究[21]表明, TPX2与CC等多种肿瘤的发生有关。据报道, TPX2在许多癌症中过表达，被认为是恶性肿瘤诊断和预后的标志物[22]。因此，寻求针对CC的 TPX2基因靶向疗法可能是一种减轻相关副作用的治愈方法。本研究结果表明, TPX2是miR-491的直接靶点，敲低TPX2能显著抑制人CC细胞的侵袭和迁移。此外，抑制TPX2可能逆转下调的miR-491诱导的CC细胞迁移和侵袭的部分功能，说明miR-491通过与其3′UTR碱基配对对TPX2具有调节功能，通过对TPX2表达的调控影响CC进程。尽管本研究已经发现miR-491能够通过靶向TPX2抑制CC细胞增殖、侵袭及迁移的机制作用，但其下游效应机制尚未深入探讨。此外, miR-491在临床诊断及预后的研究中仍需进一步探讨。总之, miR-491可能成为未来CC治疗的有效生物标志物和治疗靶点。
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表 1 2组术后8 h VAS评分及各指标比较(x±s)[n(%)]
组别 VAS评分/分 囊袋血肿 皮下瘀血 术肢肿胀 压迫袋移位 对照组(n=50) 4.6±0.5 8(16.0) 12(24.0) 15(30.0) 8(16.0) 观察组(n=50) 2.5±0.3* 2(4.0)* 4(8.0)* 6(12.0)* 1(2.0)* VAS: 视觉模拟评分法。与对照组比较, *P < 0.05。 
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表 2 2组术后24 h各指标比较(x±s)[n(%)]
组别 电极移位 皮肤水泡或感染 首次下床活动时间/h 便秘 腰背痛 舒适度评分/分 对照组(n=50) 3(6.0) 10(20.0) 29.8±5.5 8(16.0) 14(28.0) 76.8±10.2 观察组(n=50) 1(2.0) 3(6.0)* 5.5±0.6* 2(4.0)* 5(10.0)* 89.6±7.5* 与对照组比较, *P < 0.05。
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