circ_0000885通过靶向miR-944调控胃癌细胞的增殖和凋亡

次仁央宗; 王朝华

doi:10.7619/jcmp.20231976

circ_0000885通过靶向miR-944调控胃癌细胞的增殖和凋亡

西藏自治区第二人民医院消化科, 西藏拉萨, 850000

基金项目:

西藏自治区科技计划项目 XZ201801-GB-02

详细信息

中图分类号: R735.2;R446
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出版历程
- 收稿日期: 2023-06-19
- 修回日期: 2023-09-04
- 网络出版日期: 2023-10-18

Circ_0000885 regulates proliferation and apoptosis of gastric cancer cells by targeting miR-944

Digestive Department, the Second People's Hospital of Tibet Autonomous Region, Lhasa, Tibet, 850000

摘要

摘要:
目的
探讨环状RNA _0000885(circ_0000885)对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。
方法
选取30例胃癌组织及相应癌旁组织; 体外培养人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484。将AGS细胞分为NC组、si-NC组、si-circ_0000885组、微小RNA(miR)-NC组、miR-944组、si-circ_0000885+anti-miR-NC组、si-circ_0000885+anti-miR-944组。采用逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_0000885和miR-944的表达水平; 分别利用MTT、流式细胞术和Western blot检测细胞活性、凋亡和相关蛋白的表达; 双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000885和miR-944的靶向关系。
结果
与癌旁组织比较，胃癌组织中circ_0000885表达升高, miR-944表达降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。与GES-1细胞比较，胃癌细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484中的circ_0000885表达水平升高，miR-944表达水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。敲减circ_0000885或过表达miR-944均降低了AGS细胞OD值和增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2蛋白水平，升高了细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P < 0.05)。circ_0000885靶向调控miR-944表达，且下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响(P < 0.05)。
结论
敲减circ_0000885可通过靶向上调miR-944抑制AGS细胞增殖，并促进凋亡。
- circ_0000885 /
- miR-944 /
- 胃癌 /
- 增殖 /
- 凋亡
Abstract:
Objective
To investigate the effects of circRNA_0000885 (circ_0000885) on the proliferation and apoptosis of AGS cells in gastric cancer and its molecular mechanism.
Methods
The tissues of 30 cases of gastric cancer and corresponding adjacent tissues were selected. Human normal gastric mucosa cells GES-1 and gastric cancer cell lines AGS, HGC-27, N87, SNU-484 were cultured in vitro. AGS cells were divided into NC group, si-NC group, si-circ_0000885 group, MicroRNA(miR)-NC group, miR-944 group, si-circ_0000885+anti-miR-NC group and si-circ_0000885+anti-miR-944 group. The expression levels of circ_0000885 and miR-944 were detected by reverse transcriptionreal-time quantitative polymerasechain reaction (RT-qPCR); the cell activity, apoptosis and expression of related proteins were detected by MTT, flow cytometry and Western blot, respectively; the dual luciferase reporter gene assay was used to detect the targeting relationship between circ_0000885 and miR-944.
Results
Compared with adjacent tissues, the expression of circ_0000885 in gastric cancer tissues was significantly increased, and the expression of miR-944 was significantly decreased (P < 0.05). Compared with GES-1 cells, the expression of circ_0000885 in gastric cancer cell lines AGS, HGC-27, N87, SNU-484 was significantly increased, and the expression of miR-944 was significantly decreased (P < 0.05). Knockdown circ_0000885 or overexpression of miR-944 decreased OD value, proliferated cell nuclear antigen (PCNA) and Bcl-2 protein levels, and increased apoptosis rate and Bax protein levels in AGS cells (P < 0.05). The circ_0000885 targeted miR-944 expression, and down-regulation of miR-944 reversed the effects of circ_0000885 knockdown on proliferation and apoptosis of AGS cells (P < 0.05).
Conclusion
Knockdown of circ_0000885 inhibits the proliferation of AGS cells and promotes apoptosis by targeting up-regulation of miR-944.
- circ_0000885 /
- miR-944 /
- gastric cancer /
- proliferation /
- apoptosis

HTML全文

胃癌发病率高，其早期临床症状不明显，确诊时多为晚期^[1]。目前，胃癌的治疗主要包括手术、化疗、放疗和靶向治疗等手段，但由于晚期、耐药和复发率高，患者5年生存率较低^[2]。胃癌已严重影响患者的生活质量和生命健康。环状RNA(circRNA)是一类具有共价闭环的非编码RNA，由于其环状结构, circRNA非常稳定，此外circRNA序列高度保守，并以组织或细胞特异性的方式表达^[3-4]。研究^[5]表明, circ_0000885在骨肉瘤中表达上调，可作为骨肉瘤预后不良的生物标志物。下调circ_0000885可抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和诱导细胞周期阻滞^[6]。沉默circ_0000885可抑制肝癌细胞的生长能力^[7]。然而, circ_0000885在胃癌中作用的相关研究较少。此外，通过Circinteractome预测软件发现，微小RNA(miR)-944在circ_0000885上有结合位点。研究^[8]表明, miR-944在胃癌细胞中表达下降，过表达miR-944可抑制胃癌细胞的上皮间质转化，抑制其表达可促进胃癌细胞转化。尽管已有研究确定miR-944在胃癌中的作用，但circ_0000885在胃癌中的作用以及miR-944是否参与其调控作用还尚未阐明。因此，本研究探讨circ_0000885在胃癌AGS细胞增殖和凋亡中的作用以及circ_0000885与miR-944之间是否存在靶向关系。

1. 材料与方法

1.1 临床资料

本研究共招募30例在本院收治的胃癌患者(2017年1月—2019年1月)，患者术前均未接受放疗和化疗，手术获得胃癌组织及相应癌旁组织后, -80 ℃保存，每例患者均签署知情同意书。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2 材料

人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484购自中国科学院上海细胞库; 胎牛血清、胰蛋白酶、DMEM培养液购自美国Hyclone公司; 由日本Takara公司提供Trizol试剂、反转录、qRT-PCR试剂盒; 上海晶抗生物工程有限公司提供MTT和Annexin V-FITC/PI试剂盒; RIPA蛋白裂解液、二辛可宁酸(BCA)试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司; 美国Invitrogen公司提供Lipofectamine2000试剂。

1.3 细胞转染与分组

取对数生长期AGS细胞，根据Lipofectamine2000转染试剂说明书，将si-NC、si-circ_0000885、pcDNA、pcDNA-circ_0000885、miR-NC、miR-944、si-circ_0000885与anti-miR-NC、si-circ_0000885与anti-miR-944转染至AGS细胞，分别记为si-NC组、si-circ_0000885组、pcDNA组、pcDNA-circ_0000885组、miR-NC组、miR-944, si-circ_0000885+anti-miR-NC组或si-circ_0000885+anti-miR-944组，未处理的细胞设为NC组。

1.4 逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_0000885和miR-944的表达

提取细胞总RNA，反转录成cDNA，将合成的cDNA用作PCR扩增的模板，分别以GAPDH和U6为内参，检测circ_0000885和miR-944的表达水平，相对表达量采用2^-△△Ct法计算。circ_0000885上游引物: 5′-ACTGCCAGAAAGTGT GTCCC-3′; 下游引物: 5′-CGGGC CTCGTTTTGAAC ATC-3′。miR-944上游引物: 5′-G CCGAGAAATTA TTGTACAT-3′; 下游引物: 5′-CTCAACTGGTGTCG TGGA-3′。GAPDH上游引物: 5′-CCACCCATGGC AAATTCCATGGCA-3′; 下游引物: 5′-TCTAGACG GCAGGTCAGGTCCACC-3′。U6上游引物: 5′-GC TTCGGCAGCACATATACTAA-3′; 下游引物: 5′-A ACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。

1.5 MTT

取各组AGS细胞悬液(2.5×10⁴个/mL), 96孔板每孔加入100 μL, 随后向每个孔中加入20 μL MTT (5 mg/mL), 37 ℃孵育4 h, 弃细胞上清液，用DMSO溶解MTT晶体，并在450 nm处测量吸光度。

1.6 流式细胞术

收集各组细胞，重悬于1×结合缓冲液，并用Annexin V-FITC、碘化丙啶(PI)各5 μL, 在20 ℃下染色15 min, 通过FACScan流式细胞仪对样品凋亡进行分析。

1.7 蛋白质免疫印迹(Western blot)

用1×细胞裂解缓冲液提取细胞蛋白。将每个样品的蛋白质(50 μg)进行电泳，并转移到硝化纤维膜上。随后5%脱脂牛奶封闭，一抗4 ℃孵育过夜。然后，山羊抗兔HRP标记的二抗室温孵育2 h。ECL底物试剂盒用于进行信号的化学发光检测, Image J软件分析蛋白条带灰度值。

1.8 统计学分析

采用SPSS 21.0统计学软件分析数据，计量资料均符合正态分布，以(x±s)表示，两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析, P < 0.05为差异有统计学意义。

2. 结果

2.1 circ_0000885和miR-944在胃癌组织中的表达

相较于癌旁组织，胃癌组织中circ_0000885高表达, miR-944低表达，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 1。与GES-1细胞比较，胃癌细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484中, circ_0000885表达升高, miR-944表达降低，差异有统计学意义(P < 0.05)。circ_0000885在AGS细胞中的表达水平高于HGC-27、N87、SNU-48细胞，差异有统计学意义(P < 0.05), 故后续实验选择AGS细胞，见表 2。

表 1 circ_0000885和miR-944在胃癌组织中的表达(x±s)

组别	circ_0000885	miR-944
癌旁组织(n=30)	1.00±0.10	1.00±0.08
胃癌组织(n=30)	2.32±0.28^*	0.56±0.07^*
与癌旁组织比较, * P < 0.05。

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表 2 circ_0000885和miR-944在胃癌细胞系中的表达(x±s)

细胞系	circ_0000885	miR-944
GES-1(n=9)	1.01±0.12	1.02±0.09
AGS(n=9)	3.25±0.37^*	0.39±0.04^*
HGC-27(n=9)	2.78±0.29^*#	0.46±0.06^*
N87细胞系	2.42±0.32^*#	0.51±0.05^*
SNU-484细胞系	2.19±0.25^*#	0.49±0.04^*
与GES-1细胞比较, * P < 0.05; 与AGS细胞比较, #P < 0.05。

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2.2 敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

与si-NC组比较, si-circ_0000885组的circ_0000885表达降低, AGS细胞OD值以及PCNA、Bcl-2蛋白水平降低，凋亡率和Bax蛋白水平升高，差异有统计学意义(P < 0.05); NC组和si-NC组各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见图 1和表 3。

图 1 敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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表 3 circ_0000885敲低对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	circ_0000885	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	circ_0000885	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
NC组(n=9)	0.99±0.07	0.58±0.07	1.07±0.10	1.41±0.17	6.49±0.72	0.67±0.08	0.61±0.08	0.20±0.03
si-NC组(n=9)	1.02±0.11	0.56±0.05	1.04±0.13	1.45±0.20	6.23±0.81	0.65±0.07	0.58±0.06	0.22±0.02
si-circ_0000885组(n=9)	0.42±0.05^*	0.42±0.03^*	0.61±0.07^*	0.82±0.08^*	23.65±2.85^*	0.35±0.04^*	0.26±0.03^*	0.72±0.08^*
与si-NC组比较, * P < 0.05。

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2.3 circ_0000885靶向调控miR-944的表达

通过Circinteractome的预测, miR-944被发现在circ_0000885上有结合位点(图 2)。转染miR-944, WT-circ_0000885组的荧光素酶活性减低，差异有统计学意义(P < 0.05), 但不影响MUT-circ_0000885组(P < 0.05), 见表 4。circ_0000885上调或下调可分别抑制和促进细胞中miR-944的表达，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 5。

图 2 circ_0000885的序列中含有与miR-944互补的核苷酸序列

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表 4 双荧光素酶报告实验(x±s)

组别	WT-circ_0000885	MUT-circ_0000885
miR-NC组(n=9)	1.01±0.09	1.00±0.12
miR-944组(n=9)	0.38±0.04^*	0.99±0.10
与miR-NC组比较, * P < 0.05。

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表 5 circ_0000885调控miR-944表达(x±s)

组别	circ_0000885	miR-944
pcDNA组(n=9)	1.02±0.13	1.00±0.11
pcDNA-circ_0000885组(n=9)	2.89±0.36^*	0.46±0.05^*
si-NC组(n=9)	1.00±0.08	1.01±0.08
si-circ_0000885组(n=9)	0.43±0.05^#	3.11±0.46^#
与pcDNA组比较, * P < 0.05; 与si-NC组比较, #P < 0.05。

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2.4 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响

与miR-NC组比较, miR-944组的miR-944表达升高, AGS细胞OD值以及PCNA、Bcl-2蛋白水平降低，凋亡率和Bax蛋白水平升高，差异有统计学意义(P < 0.05); NC组和miR-NC组各指标比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见图 3、表 6。

图 3 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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表 6 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	miR-944	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	miR-944	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
NC组(n=9)	1.02±0.12	0.55±0.07	1.10±0.14	1.43±0.19	7.12±0.83	0.68±0.08	0.59±0.07	0.19±0.02
miR-NC组(n=9)	1.00±0.15	0.58±0.06	1.08±0.12	1.47±0.13	6.85±0.72	0.66±0.07	0.61±0.05	0.21±0.03
miR-944组(n=9)	2.93±0.42^*	0.39±0.04^*	0.63±0.07^*	0.79±0.09^*	24.27±2.73^*	0.38±0.04^*	0.25±0.03^*	0.74±0.08^*
与miR-NC组比较, * P < 0.05。

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2.5 miR-944敲低逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

相较于si-circ_0000885+anti-miR-NC组, si-circ_0000885+anti-miR-944组的miR-944表达降低, AGS细胞OD值以及PCNA、Bcl-2蛋白水平升高，凋亡率和Bax蛋白水平降低，差异有统计学意义(P < 0.05); si-circ_0000885组和si-circ_0000885+anti-miR-NC组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见图 4、表 7。

图 4 下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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表 7 下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	miR-944	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	miR-944	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
si-circ_0000885组(n=9)	1.02±0.13	0.41±0.05	0.64±0.06	0.78±0.08	23.36±2.49	0.36±0.04	0.25±0.02	0.69±0.08
si-circ_0000885+anti-miR-NC组(n=9)	1.00±0.09	0.43±0.04	0.62±0.07	0.81±0.07	25.15±2.88	0.34±0.04	0.23±0.03	0.71±0.06
si-circ_0000885+anti-miR-944组(n=9)	0.65±0.07^*	0.51±0.06^*	0.89±0.09^*	1.21±0.16^*	13.34±1.52^*	0.53±0.06^*	0.45±0.05^*	0.36±0.04^*
相较于si-circ_0000885+anti-miR-NC组, * P < 0.05。

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3. 讨论

circRNA异常表达与胃癌的恶性表型密切相关。如circPTK2在胃癌组织和细胞中表达显著下调，上调circPTK2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭，而抑制circPTK2表达则效果相反^[9]。circ_0000751低表达与胃癌患者的肿瘤淋巴结转移分期、肿瘤体积和淋巴结转移呈反比，过表达circ_0000751可抑制胃癌肿瘤的进展、迁移、侵袭和转移^[10]。circPTK2表达下调与胃癌患者的低生存率相关，过表达circPTK2在体内外可抑制胃癌细胞的增殖、集落形成、DNA合成、侵袭、异种移植瘤生长和肺转移，而下调circPTK2则结果相反^[11]。过表达或上调circDIDO1可抑制或促进胃癌细胞增殖、迁移和侵袭^[12]。circ_0006470在胃癌细胞中表达升高，沉默circ_0006470可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭^[13]。下调circ-HN1可通过miR-485-5p/GSK3A通路抑制胃癌进展^[14]。敲除circ_0091994可通过诱导凋亡降低胃癌细胞的活力^[15]。circ-RNF111敲低可诱导胃癌细胞凋亡，减弱细胞糖酵解、增殖以及移动能力^[16]。本研究中，胃癌组织和细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484中高表达circ_0000885, 敲减circ_0000885降低了AGS细胞OD值以及PCNA、Bcl-2表达水平，升高了细胞凋亡率和Bax表达水平，提示敲减circ_0000885可抑制AGS细胞增殖，并促进凋亡。

研究^[6]表明, circ_0000885可作为内源竞争性RNA调控微小RNA(miRNA)表达来影响骨肉瘤细胞的恶性行为。通过Circinteractome预测网站，本研究发现, miR-944在circ_0000885上存在结合位点，随后，本研究证实miR-944是circ_0000885的靶基因，且circ_0000885负向调控胃癌细胞中miR-944的表达。研究^[17]显示, miR-944在人类多种癌症中发挥抑癌作用。肺腺癌组织和细胞低表达miR-944, 上调miR-944可抑制癌症细胞的生长。上调miR-944可降低结直肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力，而敲除miR-944表达则结果相反^[18]。miR-944在三阴性乳腺癌细胞中低表达，其过表达可抑制癌细胞的侵袭、迁移、和上皮间质转化^[19]。与既往研究一致，本研究也证实miR-944在为胃癌中发挥抗癌作用。胃癌组织和细胞系AGS、HGC-27、N87、SNU-484中低表达miR-944, 过表达miR-944降低了AGS细胞OD值以及PCNA、Bcl-2表达水平，升高了细胞凋亡率和Bax表达水平。进一步回复实验显示，下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响，OD值以及PCNA、Bcl-2表达水平升高，凋亡率和Bax表达水平降低。

综上所述，胃癌组织和细胞中高表达circ_0000885, 低表达miR-944。miR-944是circ_0000885的功能靶标，敲低circ_0000885可通过靶向上调miR-944抑制胃癌细胞的生长，提示circ_0000885可能是胃癌的潜在治疗靶点。但本研究仅限于体外实验，其在体内的作用还有待进一步研究。

图 1 敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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图 2 circ_0000885的序列中含有与miR-944互补的核苷酸序列

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图 3 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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图 4 下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响

A: 细胞凋亡流式图; B: 增殖和凋亡相关蛋白表达。

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表 1 circ_0000885和miR-944在胃癌组织中的表达(x±s)

组别	circ_0000885	miR-944
癌旁组织(n=30)	1.00±0.10	1.00±0.08
胃癌组织(n=30)	2.32±0.28^*	0.56±0.07^*
与癌旁组织比较, * P < 0.05。

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表 2 circ_0000885和miR-944在胃癌细胞系中的表达(x±s)

细胞系	circ_0000885	miR-944
GES-1(n=9)	1.01±0.12	1.02±0.09
AGS(n=9)	3.25±0.37^*	0.39±0.04^*
HGC-27(n=9)	2.78±0.29^*#	0.46±0.06^*
N87细胞系	2.42±0.32^*#	0.51±0.05^*
SNU-484细胞系	2.19±0.25^*#	0.49±0.04^*
与GES-1细胞比较, * P < 0.05; 与AGS细胞比较, #P < 0.05。

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表 3 circ_0000885敲低对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	circ_0000885	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	circ_0000885	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
NC组(n=9)	0.99±0.07	0.58±0.07	1.07±0.10	1.41±0.17	6.49±0.72	0.67±0.08	0.61±0.08	0.20±0.03
si-NC组(n=9)	1.02±0.11	0.56±0.05	1.04±0.13	1.45±0.20	6.23±0.81	0.65±0.07	0.58±0.06	0.22±0.02
si-circ_0000885组(n=9)	0.42±0.05^*	0.42±0.03^*	0.61±0.07^*	0.82±0.08^*	23.65±2.85^*	0.35±0.04^*	0.26±0.03^*	0.72±0.08^*
与si-NC组比较, * P < 0.05。

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表 4 双荧光素酶报告实验(x±s)

组别	WT-circ_0000885	MUT-circ_0000885
miR-NC组(n=9)	1.01±0.09	1.00±0.12
miR-944组(n=9)	0.38±0.04^*	0.99±0.10
与miR-NC组比较, * P < 0.05。

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表 5 circ_0000885调控miR-944表达(x±s)

组别	circ_0000885	miR-944
pcDNA组(n=9)	1.02±0.13	1.00±0.11
pcDNA-circ_0000885组(n=9)	2.89±0.36^*	0.46±0.05^*
si-NC组(n=9)	1.00±0.08	1.01±0.08
si-circ_0000885组(n=9)	0.43±0.05^#	3.11±0.46^#
与pcDNA组比较, * P < 0.05; 与si-NC组比较, #P < 0.05。

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表 6 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	miR-944	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	miR-944	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
NC组(n=9)	1.02±0.12	0.55±0.07	1.10±0.14	1.43±0.19	7.12±0.83	0.68±0.08	0.59±0.07	0.19±0.02
miR-NC组(n=9)	1.00±0.15	0.58±0.06	1.08±0.12	1.47±0.13	6.85±0.72	0.66±0.07	0.61±0.05	0.21±0.03
miR-944组(n=9)	2.93±0.42^*	0.39±0.04^*	0.63±0.07^*	0.79±0.09^*	24.27±2.73^*	0.38±0.04^*	0.25±0.03^*	0.74±0.08^*
与miR-NC组比较, * P < 0.05。

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表 7 下调miR-944逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响(x±s)

组别	miR-944	OD值(450 nm)			凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
组别	miR-944	24 h	48 h	72 h	凋亡率/%	PCNA	Bcl-2	Bax
si-circ_0000885组(n=9)	1.02±0.13	0.41±0.05	0.64±0.06	0.78±0.08	23.36±2.49	0.36±0.04	0.25±0.02	0.69±0.08
si-circ_0000885+anti-miR-NC组(n=9)	1.00±0.09	0.43±0.04	0.62±0.07	0.81±0.07	25.15±2.88	0.34±0.04	0.23±0.03	0.71±0.06
si-circ_0000885+anti-miR-944组(n=9)	0.65±0.07^*	0.51±0.06^*	0.89±0.09^*	1.21±0.16^*	13.34±1.52^*	0.53±0.06^*	0.45±0.05^*	0.36±0.04^*
相较于si-circ_0000885+anti-miR-NC组, * P < 0.05。

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参考文献(19)

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[2]	ZHANG H Z, FU T T, ZHANG C P. microRNA-1249 targets G protein subunit alpha 11 and facilitates gastric cancer cell proliferation, motility and represses cell apoptosis[J]. OncoTargets Ther, 2021, 14: 1249-1259. doi: 10.2147/OTT.S272599
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[8]	PAN T, CHEN W J, YUAN X M, et al. miR-944 inhibits metastasis of gastric cancer by preventing the epithelial-mesenchymal transition via MACC1/Met/AKT signaling[J]. FEBS Open Bio, 2017, 7(7): 905-914. doi: 10.1002/2211-5463.12215
[9]	GAO L, XIA T T, QIN M D, et al. CircPTK2 suppresses the progression of gastric cancer by targeting the miR-196a-3p/AATK axis[J]. Front Oncol, 2021, 11: 706415. doi: 10.3389/fonc.2021.706415
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[11]	FAN H N, ZHAO X Y, LIANG R, et al. CircPTK2 inhibits the tumorigenesis and metastasis of gastric cancer by sponging miR-134-5p and activating CELF2/PTEN signaling[J]. Pathol Res Pract, 2021, 227: 153615. doi: 10.1016/j.prp.2021.153615
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1. 材料与方法
1.1 临床资料
1.2 材料
1.3 细胞转染与分组
1.4 逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_0000885和miR-944的表达
1.5 MTT
1.6 流式细胞术
1.7 蛋白质免疫印迹(Western blot)
1.8 统计学分析
2. 结果
2.1 circ_0000885和miR-944在胃癌组织中的表达
2.2 敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响
2.3 circ_0000885靶向调控miR-944的表达
2.4 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响
2.5 miR-944敲低逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响
3. 讨论

1. 材料与方法
1.1 临床资料
1.2 材料
1.3 细胞转染与分组
1.4 逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circ_0000885和miR-944的表达
1.5 MTT
1.6 流式细胞术
1.7 蛋白质免疫印迹(Western blot)
1.8 统计学分析
2. 结果
2.1 circ_0000885和miR-944在胃癌组织中的表达
2.2 敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响
2.3 circ_0000885靶向调控miR-944的表达
2.4 过表达miR-944对AGS细胞增殖和凋亡的影响
2.5 miR-944敲低逆转了敲减circ_0000885对AGS细胞增殖和凋亡的影响
3. 讨论

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circ_0000885通过靶向miR-944调控胃癌细胞的增殖和凋亡

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