Effect of stent-assisted coil intracranial embolization in patients with ruptured intracranial aneurysms
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摘要:目的
探讨支架辅助弹簧圈颅内栓塞对颅内破裂动脉瘤患者的影响。
方法选取110例颅内破裂动脉瘤患者为研究对象，根据支架辅助方式将其分为对照组（单纯弹簧圈栓塞术，n=55）和研究组（支架辅助弹簧圈栓塞术，n=55）。比较2组患者手术情况及住院时间、神经功能、血清髓磷脂碱性蛋白（MBP）水平、临床疗效以及脑脊液炎症因子水平。
结果术后，2组患者神经生长因子（NGF）和脑源性神经营养因子（BDNF）水平高于术前，且研究组高于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。术后，2组患者血清MBP和脑脊液白细胞介素-4（IL-4）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-8（IL-8）水平高于术前，但研究组低于对照组，差异有统计学意义（P < 0.05）。研究组总有效率为96.36%，高于对照组的83.64%，差异有统计学意义（P < 0.05）。
结论支架辅助弹簧圈颅内栓塞对颅内破裂动脉瘤患者效果较好，可改善患者神经功能，降低其脑脊液炎症水平和血清MBP水平。
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关键词:
- 支架辅助弹簧圈颅内栓塞 /
- 颅内破裂动脉瘤 /
- 神经功能 /
- 髓磷脂碱性蛋白 /
- 炎症因子
Abstract:ObjectiveTo investigate the effect of stent-assisted coil intracranial embolization in patients with ruptured intracranial aneurysms.
MethodsA total of 110 patients with ruptured intracranial aneurysm were selected as the study objects. The patients were divided into control group (pure embolization with spring coil, n=55) and study group (stent-assisted embolization with spring coil, n=55) according to the stent assisted method. The operation status, length of hospital stay, nerve function, serum myelin basic protein (MBP) level, clinical efficacy and cerebrospinal fluid inflammatory factor level were compared between the two groups.
ResultsAfter surgery, the levels of nerve growth factor (NGF) and brain-derived neurotrophic factor (BDNF) in the two groups were significantly higher than those before surgery, and those in the study group were significantly higher than those in the control group (P < 0.05). After operation, the levels of serum MBP and cerebrospinal fluid interleukin-4 (IL-4), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and interleukin-8 (IL-8) in two groups were significantly higher than those before operation, and those in the study group were significantly lower than those in the control group (P < 0.05). The total effective rate of the study group was 96.36%, which was significantly higher than 83.64% of the control group (P < 0.05).
ConclusionStent assisted coil intracranial embolization has a good effect in patients with ruptured intracranial aneurysm, which can improve the nerve function of patients, reduce the level of cerebrospinal fluid inflammation and serum MBP.
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结直肠癌是最常见的消化道肿瘤之一，其发病率及致死率逐年增高[1]。研究[2]表明，结直肠腺瘤性息肉是结直肠癌的癌前病变。早期发现、早期阻断腺瘤的恶性病变，对降低结直肠癌的发病率有重要意义。假性蛋白激酶3(Trib3)广泛参与癌症、代谢性疾病、心血管疾病等疾病的发生发展过程[3]。SNEZHKINA A V等[4]研究结果显示, Trib3在结直肠癌中表达上调。本研究课题组前期通过生物信息学预测网站(http://www.mirbase.org/index.shtml)发现微小RNA-1827(miR-1827)与Trib3存在靶向结合位点，推测Trib3、miR-1827可能通过相互作用影响结直肠癌的发生发展。然而，目前仍缺乏Trib3、miR-1827与结肠息肉的进一步相关性研究。本研究通过检测正常结直肠组织、结直肠息肉组织及结直肠癌组织中Trib3、miR-1827表达水平的变化，探讨Trib3、miR-1827在癌变过程中的意义，现报告如下。
1. 材料与方法
1.1 一般资料
选取2019年12月—2021年3月住院的97例结直肠癌患者癌组织作为结直肠癌组，年龄40~71岁，平均(50.08±9.33)岁，男53例，女44例。选取同期86例结直肠息肉患者息肉组织作为息肉组，年龄41~75岁，平均(50.13±10.02)岁，男46例，女40例。选取同期行结直肠镜检查的92例健康体检者正常结直肠黏膜组织作为对照组，年龄41~74岁，平均(50.26±10.31)岁，男49例，女43例。收集并整理所有受试者临床资料，包括性别、年龄，结直肠息肉患者黏膜状态、分叶、蒂形态、息肉直径、组织病理学分型、息肉数目，以及结直肠癌患者大体类型、浸润程度、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度。
纳入标准: ①结直肠癌及结直肠息肉经病理确诊者，符合诊疗规范[5-6]; ②受试者临床资料及组织标本保存完整; ③入组前未进行过放化疗、细胞分子靶向治疗等治疗者; ④经本院临床研究伦理委员会批准，符合伦理学标准，所有受试者均为自愿参加。排除标准: ①有炎症性肠病、家族性息肉病者; ②有严重心、肝、肾等脏器病变者; ③孕期、哺乳期妇女; ④有其他恶性肿瘤或恶性肿瘤史者。
1.2 研究方法
1.2.1 样品采集及保存
采集健康体检者结肠镜检查时的正常结直肠黏膜组织以及结直肠息肉患者、结直肠癌患者手术时切除的息肉组织、癌组织，液氮中速冻，保存待测。
1.2.2 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组织miR-1827表达水平
采用试剂盒(RNA提取试剂盒购自上海雅吉生物科技有限公司，反转录试剂盒购自海基生物科技有限公司)提取组织总RNA并反转录为cDNA, 采用7700型qRT-PCR仪(美国Applied Biosystems公司)扩增miR-1827及其内参U6。反应体系为: cDNA模板(50 ng/μL)1 μL, 上、下游引物(10 μmol/L)各0.4 μL, SYBR Premix Ex Taq Ⅱ(2×)5 μL, Rox reference dye(50×)(南京北鱼生物科技有限公司)0.2 μL, ddH2O 3.0 μL, 重复3次。采用2-△△CT法计算正常结直肠黏膜组织、结直肠息肉组织、结直肠癌组织中miR-1827的相对表达量。引物序列见表 1。
表 1 qRT-PCR引物序列基因 上游引物5′-3′ 下游引物5′-3′ miR-1827 CGAGAGCGCAGTGCAGTGC GCAGCAGTACCTAGTGAGCA U6 GCAGTCAGCGCAGTCGATC GACAAGACTCGCTGATCTCG 1.2.3 免疫组织化学法检测各组织Trib3表达水平
将采集的组织进行10%中性多聚甲醛固定、切片等一系列操作。采用免疫组织化学法(试剂盒购自德国罗氏公司)检测组织Trib3表达水平，操作步骤参考试剂盒说明。染色结束后每张切片选取癌细胞多的5个视野，每个视野计数100个细胞，判定Trib3阳性表达率。按照染色强度评分: 无着色为0分，棕黄色为1分，棕褐色为2分。按照阳性细胞百分率评分: 无阳性细胞为0分，阳性细胞数 < 25%为1分，阳性细胞数为25%~50%为2分，阳性细胞数>50%为3分。总分为两项评分相乘，总分≤2分为Trib3低表达，总分>2分为Trib3高表达。
1.3 统计学分析
采用SPSS 25.0统计软件分析数据，计量资料经正态性检验符合正态分布，以均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析比较3组间差异，采用SNK-q检验进行组间多重比较; 计数资料以[n(%)]表示，组间比较行卡方检验; 采用Spearman法分析结直肠息肉组织及结直肠癌组织中Trib3与miR-1827的相关性; 采用多因素COX回归分析影响结直肠息肉和结直肠癌患者预后的因素。P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 对照组、息肉组和结直肠癌组Trib3、miR-1827表达水平比较
结直肠癌组Trib3高表达比率高于息肉组和对照组, miR-1827水平低于息肉组和对照组，差异有统计学意义(P < 0.01); 息肉组Trib3高表达比率高于对照组, miR-1827水平低于对照组，差异有统计学意义(P < 0.01)。见表 2、图 1。
表 2 对照组、息肉组和结直肠癌组Trib3、miR-1827表达水平比较(x±s)[n(%)]组别 n Trib3高表达 miR-1827 对照组 92 9(9.78)** 1.01±0.23** 息肉组 86 41(47.67)**## 0.69±0.20**## 结直肠癌组 97 84(86.60) 0.39±0.14 与结直肠癌组比较, **P < 0.01;
与对照组比较, ##P < 0.01。2.2 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者临床病理特征的关系
根据结直肠息肉患者息肉组织Trib3高表达情况及miR-1827表达水平均值(0.69), 将患者分为Trib3高表达组41例和Trib3低表达组45例, miR-1827高表达组43例和miR-1827低表达组43例。结果显示，Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者性别、年龄、黏膜状态、分叶、蒂形态无相关性(P>0.05), 与息肉直径、组织病理学分型、息肉数目有相关性(P < 0.01)。见表 3。
表 3 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者临床病理特征的关系[n(%)]临床病理特征 分类 n Trib3低表达组
(n=45)Trib3高表达组
(n=41)χ2 P miR-1827低表达组
(n=43)miR-1827高表达组
(n=43)χ2 P 性别 男 46 24(52.17) 22(47.83) 0.001 0.976 21(45.65) 25(54.35) 0.748 0.387 女 40 21(52.50) 19(47.50) 22(55.00) 18(45.00) 年龄 < 50岁 41 20(48.78) 21(51.22) 0.395 0.530 20(48.78) 21(51.22) 0.047 0.829 ≥50岁 45 25(55.56) 20(44.44) 23(51.11) 22(48.89) 息肉直径 < 1 cm 36 33(91.67) 3(8.33) 38.417 < 0.001 6(16.67) 30(83.33) 27.520 < 0.001 ≥1 cm 50 12(24.00) 38(76.00) 37(74.00) 13(26.00) 组织病理学分型 腺瘤性 48 11(22.92) 37(77.08) 37.663 < 0.001 38(79.17) 10(20.83) 36.965 < 0.001 增生性 38 34(89.47) 4(10.53) 5(13.16) 33(86.84) 黏膜状态 光滑 28 14(50.00) 14(50.00) 1.159 0.560 12(42.86) 16(57.14) 0.848 0.655 粗糙 28 13(46.43) 15(53.57) 15(53.57) 13(46.43) 糜烂 30 18(60.00) 12(40.00) 16(53.33) 14(46.67) 分叶 无 58 32(55.17) 26(44.83) 0.579 0.447 30(51.72) 28(48.28) 0.212 0.645 有 28 13(46.43) 15(53.57) 13(46.43) 15(53.57) 息肉数目 单发 50 41(82.00) 9(18.00) 42.163 < 0.001 13(26.00) 37(74.00) 27.520 < 0.001 多发 36 4(11.11) 32(88.89) 30(83.33) 6(16.67) 蒂形态 无 37 19(51.35) 18(48.65) 0.025 0.875 18(48.65) 19(51.35) 0.047 0.828 有 49 26(53.06) 23(46.94) 25(51.02) 24(48.98) 2.3 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系
根据结直肠癌患者癌组织Trib3高表达情况及miR-1827表达水平均值(0.39), 将患者分为Trib3高表达组84例和Trib3低表达组13例, miR-1827高表达组48例和miR-1827低表达组49例。结果显示, Trib3、miR-1827表达水平与结直肠癌患者性别、年龄、大体类型、浸润程度无相关性(P>0.05), 与结直肠癌患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度有相关性(P < 0.05)。见表 4。
表 4 Trib3、miR-1827表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系[n(%)]临床病理特征 分类 n Trib3低表达组
(n=13)Trib3高表达组
(n=84)χ2 P miR-1827低表达组
(n=49)miR-1827高表达组
(n=48)χ2 P 性别 男 53 7(13.21) 46(86.79) 0.004 0.951 28(52.83) 25(47.17) 0.250 0.617 女 44 6(13.64) 38(86.36) 21(47.73) 23(52.27) 年龄 < 50岁 47 8(17.02) 39(82.98) 1.029 0.310 23(48.94) 24(51.06) 0.091 0.763 ≥50岁 50 5(10.00) 45(90.00) 26(52.00) 24(48.00) 肿瘤直径 < 5 cm 45 11(24.44) 34(75.56) 8.819 0.003 6(13.33) 39(86.67) 46.425 < 0.001 ≥5 cm 52 2(3.85) 50(96.15) 43(82.69) 9(17.31) 临床分期 Ⅰ、Ⅱ期 42 10(23.81) 32(76.19) 6.913 0.009 9(21.43) 33(78.557) 27.070 < 0.001 Ⅲ、Ⅳ期 55 3(5.45) 52(94.55) 40(72.73) 15(27.27) 大体类型 溃疡型 48 5(10.42) 43(89.58) 0.734 0.693 19(39.58) 29(60.42) 5.100 0.078 浸润型 24 4(16.67) 20(83.33) 16(66.67) 8(33.33) 隆起型 25 4(16.00) 21(84.00) 14(56.00) 11(44.00) 淋巴结转移 无 56 12(21.43) 44(78.57) 7.354 0.007 13(23.21) 43(76.79) 39.504 < 0.001 有 41 1(2.44) 40(97.56) 36(87.80) 5(12.20) 分化程度 中、高分化 54 11(20.37) 43(79.63) 5.097 0.024 12(22.22) 42(77.78) 39.009 < 0.001 低分化 43 2(4.65) 41(95.35) 37(86.05) 6(13.95) 浸润程度 肌层下 40 5(12.50) 35(87.50) 0.048 0.827 21(52.50) 19(47.50) 0.107 0.743 浆膜下 57 8(14.04) 49(85.96) 28(49.12) 29(50.88) 2.4 Trib3、miR-1827在结直肠息肉组织及结直肠癌组织中的相关性
经Spearman等级相关分析显示，Trib3、miR-1827在结直肠息肉组织及结直肠癌组织中均呈负相关(r=-0.349、-0.397, P < 0.05)。见表 5、表 6。
表 5 Trib3、miR-1827在结直肠息肉组织中的相关性结直肠息肉组织 miR-1827高表达(n=43) miR-1827低表达(n=43) r P Trib3高表达(n=41) 13 28 -0.349 0.001 Trib3低表达(n=45) 30 15 表 6 Trib3、miR-1827在结直肠癌组织中的相关性结直肠癌组织 miR-1827高表达(n=48) miR-1827低表达(n=49) r P Trib3高表达(n=84) 35 49 -0.397 < 0.001 Trib3低表达(n=13) 13 0 2.5 影响结直肠息肉患者和结直肠癌患者预后的多因素回归分析
以结直肠息肉患者治疗后是否无效为因变量，以Trib3、miR-1827、息肉直径、组织病理学分型、息肉数目为自变量，进行多因素COX回归分析，结果显示Trib3是结直肠息肉患者治疗无效的独立危险因素(P < 0.05), miR-1827是结直肠息肉患者治疗无效的保护因素(P < 0.05)。见表 7。
表 7 影响结直肠息肉患者治疗效果的多因素COX回归分析影响因素 B SE Wald P OR 95%CI Trib3 1.000 0.332 9.077 0.003 2.719 1.418~5.212 miR-1827 -0.127 0.044 8.291 0.004 0.881 0.808~0.960 息肉直径 0.120 0.309 0.150 0.699 1.127 0.615~2.065 组织病理学分型 0.099 0.182 0.296 0.587 1.104 0.773~1.577 息肉数目 0.091 0.110 0.681 0.409 1.095 0.883~1.358 以结直肠癌患者治疗后是否死亡为因变量，以Trib3、miR-1827、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度为自变量，进行多因素COX回归分析，结果显示Trib3、临床分期是结直肠癌患者死亡的独立危险因素(P < 0.05), miR-1827是结直肠癌患者死亡的保护因素(P < 0.05)。见表 8。
表 8 影响结直肠癌患者死亡的多因素COX回归分析影响因素 B SE Wald P OR 95%CI Trib3 1.045 0.304 11.813 0.001 2.843 1.567~5.159 miR-1827 -0.231 0.076 9.212 0.002 0.794 0.684~0.922 肿瘤直径 0.131 0.213 0.378 0.538 1.140 0.751~1.731 临床分期 1.006 0.274 13.484 < 0.001 2.735 1.599~4.679 淋巴结转移 0.121 0.118 1.057 0.304 1.129 0.896~1.423 分化程度 0.127 0.109 1.350 0.245 1.135 0.917~1.405 3. 讨论
结直肠癌是指直肠和结肠黏膜上皮或腺体发生的恶性肿瘤，其发病机制仍无定论，原癌基因激活、抑癌基因失活以及基因转录翻译后修饰异常均可能与结直肠癌发生发展有关[7-9]。结直肠息肉作为一种极易恶变的消化系统疾病，可能与炎症刺激、遗传等因素有关[10]。结直肠息肉病变早期缺乏特异性体征，极易被忽视，使得部分患者就诊时已出现微小病灶恶变[11]。因此，探索与结直肠息肉癌变相关的分子标志物对结直肠癌早期干预具有重要意义。
Trib3是假性蛋白激酶家族中的重要成员，可参与多种信号通路，与脂肪细胞分化、细胞凋亡、肿瘤血管密度等有着密切联系[12]。研究[13]表明，内质网应激、氧化应激、缺氧等多种应激反应均可促使Trib3蛋白表达上调。miRNA是一类非编码RNA, 可通过与靶基因mRNA的3′非编码区结合来调控蛋白翻译过程[14]。miR-1827是一种新兴的miRNA, 可通过调控c-Myc而参与肺腺癌、甲状腺乳头状癌的发生进展[15-16]。本研究前期生物信息学分析显示, Trib3、miR-1827间可能存在靶向关系，且相关性结果同样显示结直肠息肉组织及结直肠癌组织中Trib3与miR-1827均呈负相关。本研究比较了不同结直肠组织中Trib3、miR-1827的表达水平，结果显示在正常结直肠黏膜组织、结直肠息肉组织、结直肠癌组织中, Trib3水平逐渐升高, miR-1827表达水平逐渐降低, Trib3表达趋势与蔡曼妮等[17]研究结果一致，提示Trib3、miR-1827可能分别是结直肠息肉发生发展及癌变进程中的重要促进因子和抑制因子。
本研究推测，从正常结直肠黏膜到结直肠息肉的病理状态下, miR-1827表达下调，并通过靶向调控Trib3使其表达水平升高, Trib3蛋白进一步通过介导血管生成促进结直肠息肉向结直肠癌的转变进程，但具体作用机制有待结合基础实验进一步证实。此外，本研究中Trib3、miR-1827表达水平与结直肠息肉患者息肉直径、组织病理学分型、息肉数目以及结直肠癌患者肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度有关，且分别是结直肠息肉患者和结直肠癌患者预后不良的危险因素和保护因素，提示可能是由于结直肠息肉发展为结直肠癌是一个复杂、多阶段的漫长进程, Trib3、miR-1827在此过程中参与息肉的发生发展，同时在癌变发生发展过程中发挥重要作用。
综上所述, Trib3、miR-1827表达水平在结直肠黏膜组织癌变进程中分别呈升高和降低趋势，且二者均与结直肠癌肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移、分化程度有关, Trib3、miR-1827有望作为结直肠息肉恶变的重要监测指标及治疗靶点。检测Trib3、miR-1827表达变化可监测结直肠息肉恶变过程，进而进行结直肠癌的早期预防。
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表 1 2组患者一般资料比较(x±s)
组别 n 性别 年龄/岁 体质量指数/(kg/m2) 瘤体大小/mm 男 女 研究组 55 30 25 58.75±8.64 24.21±1.65 13.54±2.07 对照组 55 27 28 58.51±8.69 24.15±1.61 13.62±2.09 
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表 2 2组患者手术情况及住院时间比较(x±s)[n(%)]
组别 n 手术时间/min 术中出血 住院时间/d 研究组 55 76.87±16.52* 8(14.55)* 8.41±2.13* 对照组 55 100.29±24.32 20(36.36) 18.56±3.31 与对照组比较, * P＜0.05。
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表 3 2组患者神经功能指标比较(x±s)
ng/L 组别 n NGF BDNF 术前 术后3 d 术前 术后3 d 研究组 55 109.98±7.68 122.29±9.82*# 9.75±0.76 12.09±0.98*# 对照组 55 107.95±8.58 118.26±7.93* 9.68±0.86 11.19±0.76* NGF: 神经生长因子; BDNF: 脑源性神经营养因子。与术前相比, * P＜0.05; 与对照组比较, #P＜0.05。
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表 4 2组患者临床疗效比较[n(%)]
组别 n 良好 差 死亡 总有效 研究组 55 53(96.36) 2(3.64) 0 53(96.36)* 对照组 55 46(83.64) 8(14.55) 1(1.82) 46(83.64) 与对照组比较, * P＜0.05。
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表 5 2组患者脑脊液炎症因子水平比较(x±s)
组别 n IL-4/(ng/mL) TNF-α/(ng/mL) IL-8/(pg/mL) 术前 术后3 d 术前 术后3 d 术前 术后3 d 研究组 55 6.59±1.05 10.71±2.46*# 1.65±0.15 2.35±0.49*# 3.26±0.54 5.28±0.29*# 对照组 55 6.38±1.37 16.84±3.59* 1.69±0.18 2.98±0.64* 3.29±0.56 9.12±1.06* IL-4: 白细胞介素-4; TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL-8: 白细胞介素-8。与术前相比, * P＜0.05; 与对照组比较, #P＜0.05。
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