Protective mechanism of tanshinone on acute liver failure induced by D-galactosamine in rats
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摘要:目的
探讨丹参酮ⅡA对D-半乳糖胺(D-GalN)诱导的大鼠急性肝衰竭的保护作用及作用机制。
方法将SD大鼠随机分为Control组、Model组(腹腔注射1.1 g/kg D-GalN)、Low-dose组(腹腔注射1.1 g/kg D-GalN, 且每日采用25 mg/kg丹参酮ⅡA灌胃)和High-dose组(腹腔注射1.1 g/kg D-GalN, 每日采用50 mg/kg丹参酮ⅡA灌胃)。采用Hitachi7600-210全自动生化分析仪检测肝功能指标[谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)], 检测大鼠血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)含量; 检测肝组织中有丝分裂指数(MI)和增殖细胞核抗原(PCNA)阳性率；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-10和IL-6含量；采用试剂盒检测各组大鼠肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量; 采用TUNEL法检测肝组织中肝细胞凋亡率; 采用免疫印迹法检测肝脏组织中磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)和细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)蛋白的表达情况。
结果与Control组比较, Model组p-ERK1/2蛋白表达量升高，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose组和High-dose组p-ERK1/2蛋白表达量下降，差异有统计学意义(P < 0.05)。与Control组比较, Model组肝细胞凋亡指数增加，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose和High-dose组肝细胞凋亡指数下降，差异有统计学意义(P < 0.05)。与Control组比较, Model组MDA含量升高，而SOD和GSH含量下降，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose组和High-dose组的MDA含量均下降，而SOD和GSH含量升高，差异有统计学意义(P < 0.05)。与Control组比较, Model组TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6含量均升高，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose组和High-dose组的TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6含量均下降，差异有统计学意义(P < 0.05)。与Control组比较, Model组大鼠MI和PCNA阳性表达率均降低，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose组、High-dose组的MI和PCNA阳性表达率升高，差异有统计学意义(P < 0.05)。与Control组比较, Model组AST、ALT、γ-GT、TBIL和DBIL值升高，差异有统计学意义(P < 0.05);与Model组比较, Low-dose组、High-dose组AST、ALT、γ-GT、TBIL和DBIL值均下降，差异有统计学意义(P < 0.05)。
结论丹参酮ⅡA可能通过ERK1/2信号通路减轻D-GalN诱导的大鼠急性肝衰竭。
Abstract:ObjectiveTo investigate the protective effect and mechanism of tanshinone ⅡA on D-galactosamine (D-GalN)-induced acute liver failure in rats.
MethodsSD rats were randomly divided into control group, model group (intraperitoneal injection of 1.1 g/kg D-GalN), low-dose group (intraperitoneal injection of 1.1 g/kg D-GalN + daily gavage of 25 mg/kg tanshinone ⅡA), and High-dose group (intraperitoneal injection of 1.1 g/kg D-GalN + daily gavage of 50 mg/kg tanshinone ⅡA). Liver function indicators[aspartate aminotransferase(AST), alanine aminotransferase (ALT), and γ-glutamyltransferase (γ-GT)]were measured using a Hitachi7600-210 biochemical analyzer, and serum total bilirubin (TBIL) and direct bilirubin (DBIL) levels were determined. The mitotic index (MI) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) positivity in liver tissues were examined. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was used to detect plasma levels of tumor necrosis factor (TNF-α), interleukin (IL)-1β, IL-10, and IL-6 in rats from each group. Kits were employed to measure superoxide dismutase (SOD), glutathione (GSH), and malondialdehyde (MDA) contents in liver tissues of rats from each group. The TUNEL method was adopted to detect hepatocyte apoptosis rates in liver tissues, and immunoblotting was used to assess the expression of phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2 (p-ERK1/2) and extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK1/2) proteins in liver tissues.
ResultsCompared with the control group, the model group exhibited increased p-ERK1/2 protein expression (P < 0.05). Compared with the model group, both the low-dose and high-dose groups showed decreased p-ERK1/2 protein expression (P < 0.05). The model group had an increased hepatocyte apoptosis index compared with the control group (P < 0.05). Both the low-dose and high-dose groups demonstrated decreased hepatocyte apoptosis indices compared with the model group(P < 0.05). Compared with the control group, the model group had increased MDA levels and decreased SOD and GSH levels (P < 0.05). Both the low-dose and high-dose groups exhibited decreased MDA levels and increased SOD and GSH levels compared with the model group (P < 0.05). The model group showed increased levels of TNF-α, IL-1β, IL-10, and IL-6 compared with the control group (P < 0.05). Both the low-dose and high-dose groups had decreased levels of TNF-α, IL-1β, IL-10, and IL-6 compared with the model group (P < 0.05). Compared with the control group, the model group had decreased MI and PCNA positivity rates (P < 0.05). Both the low-dose and high-dose groups exhibited increased MI and PCNA positivity rates compared with the model group (P < 0.05). The model group had increased AST, ALT, γ-GT, TBIL and DBIL values compared with the control group (P < 0.05). Both the low-dose and high-dose groups showed decreased AST, ALT, γ-GT, TBIL and DBIL values compared with the model group (P < 0.05).
ConclusionTanshinone ⅡA may alleviate D-GalN-induced acute liver failure in rats through the ERK1/2 signaling pathway.
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急性肝衰竭是肝脏出现最初疾病征兆后迅速发展的严重并发症，是一种具有高度特异性的罕见综合征，主要起因是病毒感染[1]。该病病情进展迅猛，部分患者常错失最佳治疗时机，因此探寻新的治疗方法具有重要意义。ERK1/2信号通路可以介导细胞外刺激信号转导级联反应，在细胞增殖、生长和凋亡过程中扮演重要角色[2]。发现新的治疗靶点与通路，可为疾病治疗提供新思路。丹参酮ⅡA是从丹参中提取的关键活性成分，近年来已在临床上得到广泛应用[3-4]。李晓明等[5]研究表明，丹参酮ⅡA能提高脑梗死患者的临床疗效，改善神经功能; 赵晓溪等[6]研究则显示，丹参酮ⅡA磺酸钠可减轻心肌缺血-再灌注损伤。上述作用机制与丹参酮ⅡA抑制血小板聚集、减轻氧化应激反应有关。然而，目前关于丹参酮在急性肝衰竭中的作用尚未明确。本研究旨在明确丹参酮对急性肝衰竭的疗效，并深入探究其调控机制。
1. 材料与方法
1.1 材料
选取40只SD大鼠(6周)，雌雄各半[购自福建医科大学，许可证号SYXK(闽)2020-0005], 体质量为250~355 g, 大鼠常温下饲养，正常光照周期，自由饮水和饮食，适应性生长1周后进行后续实验。本实验严格按照实验动物管理规定[7]进行(实验动物伦理批号2023052401)。
丹参酮ⅡA(货号Y0001560)购自西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司; D-半乳糖胺(D-GalN)(纯度≥99%, 货号AG0500)购自美国sigma公司; Bio-Plex rat cytokine 23-plex购自美国Bio-rad公司(货号12005641); 封闭用山羊血清(货号YT2525)购自北京伊塔生物科技有限公司; 苏木素染液(纯度99%)购自北京博尔西科技有限公司(货号BIR615); 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒、白细胞介素(IL)-1β ELISA试剂盒、IL-10 ELISA试剂盒、IL-6 ELISA试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司(货号PT512、PI301、PI522、PI550); 超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、谷胱甘肽(GSH)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒购自北京百奥莱博科技有限公司(货号YT309、SNM198、SNM208); 增殖细胞核抗原(PCNA)抗体(货号ab29)购自Abcam公司; 磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、β-肌动蛋白(β-actin)以及二抗均购自美国Cell signaling technology公司(货号9101、9102、4970)。辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔二抗购自武汉艾美捷科技有限公司(货号A12004-1); 细胞计数试剂盒8(CCK-8)购自上海弗元生物科技有限公司(货号FY600001); GENMED染色液购自美国Thermo Fisher公司(货号937654); Hitachi7600-210全自动生化分析仪购自日本Hitachi公司; Bio-plex 200分析仪购自美国Bio-rad公司。
1.2 方法
1.2.1 急性肝衰竭模型构建
适应饲养1周后，大鼠腹腔注射1.1 g/kg D-GalN 1次，构建急性肝衰竭大鼠模型[8]。
1.2.2 给药与分组
将大鼠随机分为: Control组、Model组、Low-dose组、High-dose组，每组10只，确保每组雌雄大鼠数量相等。Model组、Low-dose组和High-dose组大鼠每日均腹腔注射1.1 g/kg D-GalN, 其中Low-dose组和High-dose组在注射D-GalN 1 h后分别给予25 mg/kg和50 mg/kg的丹参酮ⅡA灌胃。Control组给予相同剂量的无菌生理盐水。连续给药8 d后，腹腔注射2.5%的戊巴比妥钠溶液进行麻醉，取肝组织和下腔静脉血进行后续实验。
1.2.3 肝功能指标谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)检测
收集各组大鼠下腔静脉血，室温静置后3 000 r/min离心15 min分离上清。取50 μL血清，采用Hitachi7600-210全自动生化分析仪检测AST、ALT、γ-GT、总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)指标水平。
1.2.4 肝再生指标有丝分裂指数(MI)和增殖细胞核抗原(PCNA)表达情况检测[9]
采集肝脏标本，使用10%的甲醛进行固定后，制成石蜡切片，常规染色后，统计1 000个肝细胞中有丝分裂肝细胞数量，计算所得百分比即为MI。石蜡切片进行脱蜡水化后，进行冲洗，使用羊血清封闭，按顺序加入一抗、二抗和三抗，之后用DBA进行显色，再使用甲基绿进行复染，细胞核被染为褐色即为PCNA阳性，随机选取1 000个细胞，并统计PCNA阳性细胞核数量，计算PCNA阳性细胞占比。
1.2.5 炎症反应相关指标检测
收集各组大鼠下腔静脉血，室温静置后离心, 4 000 r/min离心15 min分离血浆，严格按照试剂盒操作说明检测TNF-ɑ、IL-1β、IL-10和IL-6水平。
1.2.6 氧化应激指标检测
收集各组大鼠肝脏组织，严格按照试剂盒操作步骤检测SOD活性，以及GSH和MDA含量。
1.2.7 TUNEL法检测各组大鼠肝脏组织肝细胞凋亡[10]
采集肝脏标本，使用多聚甲醛进行固定，石蜡包埋后制片。使用新鲜胰蛋白酶进行消化，TBS冲洗后滴加缓冲液。切片置于室温下滴加SABC, 混合后进行洗涤。并进行DAB显色，显色后进行洗涤，并用苏木精进行复染，切片透明后进行固定，并在显微镜下观察，凋亡细胞呈褐色。在每个切片上随机选取5个高倍视野(400倍)，每个视野选取500个细胞，总细胞计数2 500个细胞，计算凋亡细胞数量。凋亡指数(AI)计算公式为AI=凋亡细胞数/总细胞数×100%。
1.2.8 免疫印迹检测p-ERK1/2和ERK1/2蛋白表达[11]
用RIPA裂解液提取肝组织总蛋白，采用Bradford蛋白定量试剂盒进行蛋白定量分析，取等量蛋白(50 μg)经10%SDS-PAGE胶分离，电泳转移至PVDF薄膜后, 5%脱脂牛奶室温封闭1 h, 加入p-ERK1/2单克隆抗体(1∶ 2 000) 和ERK1/2单克隆抗体(1∶ 1 000)振荡, 4 ℃下孵育过夜, TBST缓冲液洗涤3次，每次10 min, HRP标记的山羊抗兔二抗室温孵育1 h, TBST缓冲液洗涤3次，每次10 min。用ECL化学发光显色试剂盒检测NTCP信号，暗室曝光X线胶片。膜片经洗脱后再用β-actin(1∶ 1 000)孵育，检测β-actin表达量，以作为内参检测蛋白上样量。采用ImageJ软件测量杂交条带的光密度值。
1.3 统计学分析
采用SPSS 26.0软件进行统计学分析，所有数据以(Mean±SD)表示，多组间两两比较采用方差分析，方差不齐时采用非参数秩和检验。P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 丹参酮ⅡA对大鼠肝损伤的影响
与Control组比较, Model组AST、ALT、γ-GT、TBIL和DBIL值升高，差异有统计学意义(P < 0.05), 表示急性肝衰竭大鼠模型构建成功。与Model组比较, Low-dose组、High-dose组AST、ALT、γ-GT、TBIL和DBIL值均下降，差异有统计学意义(P < 0.05)，且呈剂量依赖性，说明丹参酮ⅡA可改善模型大鼠肝损伤，见表 1。
表 1 各组大鼠肝功能指标水平比较(Mean±SD)组别 n AST/(U/L) ALT/(U/L) γ-GT/(U/L) TBIL/(μmol/L) DBIL/(μmol/L) Control组 10 22.34±3.57 31.52±4.49 1.10±0.09 1.25±0.13 0.47±0.04 Model组 10 376.34±35.25* 333.64±43.81* 4.14±0.39* 15.48±1.32* 5.32±0.48* Low-dose组 10 258.16±27.51# 219.47±25.55# 3.16±0.35# 10.21±0.95# 3.43±0.36# High-dose组 10 106.80±13.52#△ 106.32±12.87#△ 1.95±0.21#△ 5.67±0.61#c 1.88±0.22#△ AST: 谷草转氨酶; ALT: 谷丙转氨酶; γ-GT: γ-谷氨酰转肽酶; TBIL: 总胆红素; DBIL: 直接胆红素。与Control组比较, * P < 0.05; 与Model组比较, #P < 0.05; 与Low-dose组比较, △P < 0.05。 2.2 丹参酮ⅡA对模型大鼠肝再生相关指标的影响
与Control组比较, Model组大鼠MI和PCNA阳性表达率降低，差异有统计学意义(P < 0.05); 与Model组比较, Low-dose组、High-dose组的MI和PCNA阳性表达率升高，差异有统计学意义(P < 0.05), 表明丹参酮ⅡA可明显诱导急性肝衰竭大鼠的肝再生，且呈剂量依赖性，见表 2和图 1、图 2。
表 2 各组大鼠肝细胞MI和PCNA阳性表达率比较(Mean±SD)% 组别 n MI PCNA阳性表达率 Control组 10 3.59±0.34 5.56±0.66 Model组 10 1.55±0.40* 1.76±0.12* Low-dose组 10 6.59±0.70# 25.36±1.80# High-dose组 10 7.38±0.83#△ 30.39±3.59#△ MI: 有丝分裂指数; PCNA: 增殖细胞核抗原。
与Control组比较, * P < 0.05;
与Model组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。2.3 丹参酮ⅡA对模型大鼠炎症反应的影响
与Control组比较, Model组的TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6含量均升高，差异有统计学意义(P < 0.05); 与Model组比较, Low-dose组和High-dose组的TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6含量均下降，差异有统计学意义(P < 0.05), 且Low-dose组和High-dose组以上指标差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 3。
表 3 各组大鼠炎症因子表达水平比较(Mean±SD)pg/mL 组别 n TNF-α IL-1β IL-10 IL-6 Control组 10 13.01±1.86 19.03±2.26 4.98±0.29 13.12±0.63 Model组 10 98.58±7.82* 287.27±28.20* 41.81±2.33* 78.18±4.12* Low-dose组 10 77.52±5.21# 167.89±12.81# 28.17±1.58# 49.67±28.53# High-dose组 10 52.21±4.50#△ 80.16±5.25#△ 20.07±2.34#△ 37.16±2.25#△ TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL: 白细胞介素。与Control组比较, * P < 0.05; 与模型组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。 2.4 丹参酮ⅡA对肝衰竭大鼠氧化应激的影响
与Control组比较, Model组MDA含量升高，而SOD和GSH含量下降，差异有统计学意义(P < 0.05); 与Model组比较, Low-dose组和High-dose组的MDA含量均下降，而SOD和GSH含量升高，差异有统计学意义(P < 0.05); Low-dose组和High-dose组以上指标差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 4。
表 4 各组大鼠氧化应激指标比较(Mean±SD)组别 n SOD/(U/mg) GSH/(nmoL/mg) MDA/(μmoL/mg) Control组 10 84.56±2.39 28.73±4.02 0.80±0.05 Model组 10 21.51±1.22* 6.63±0.89* 2.10±0.06* Low-dose组 10 39.41±2.38# 14.43±1.57# 1.65±0.12# High-dose组 10 63.34±3.11#△ 24.83±3.97#△ 1.27±0.07#△ SOD: 超氧化物歧化酶; GSH: 谷胱甘肽; MDA: 丙二醛。与Control组比较, * P < 0.05; 与模型组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。 2.5 丹参酮ⅡA对肝衰竭大鼠肝细胞凋亡的影响
Control组、Model组、Low-dose组和High-dose组肝组织凋亡指数分别为(2.31±0.35)%、(29.18±2.52)%、(12.49±1.31)%和(6.27±0.74)%。与Control组比较, Model组肝细胞凋亡指数增加，差异有统计学意义(P < 0.05); 与Model组比较, Low-dose组和High-dose组凋亡指数下降，差异有统计学意义(P < 0.05), 见图 3。
2.6 丹参酮ⅡA对ERK1/2信号通路相关蛋白表达的影响
与Control组比较, Model组p-ERK1/2蛋白表达量升高，差异有统计学意义(P < 0.05); 与Model组比较, Low-dose组和High-dose组p-ERK1/2蛋白表达量下降，差异有统计学意义(P < 0.05), 且呈剂量依赖性；各组ERK1/2蛋白表达量差异无统计学意义(P>0.05), 见图 4。
3. 讨论
急性肝衰竭的临床特征包括急性肝功能恶化、肝细胞广泛坏死以及多脏器功能衰竭，往往预后不良。急性肝衰竭病死率高且缺乏有效药物治疗方案，严重危害人类健康[12-13]。丹参酮ⅡA在多种疾病中均具有显著疗效。研究[14]发现，丹参酮ⅡA通过上调Bax与Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2)和降低线粒体膜电位抑制小细胞肺癌细胞的生长，然而丹参酮ⅡA在急性肝衰竭中是否具有显著疗效尚未见报道。丹参酮ⅡA是丹参酮ⅡA中有效活性成分。陈智阳等[15]研究发现，丹参酮ⅡA可减轻脓毒症肝损伤，降低脓毒症大鼠病死率。本研究发现, D-GalN诱导后的大鼠肝功能指标AST、ALT、γ-GT、TBIL和DBIL水平显著增加，且肝再生相关指标MI和PCNA阳性率均降低，不同剂量丹参酮ⅡA给药后，急性肝衰竭大鼠肝功能指标明显恢复，同时MI和PCNA阳性率均显著增高，提示丹参酮ⅡA在急性肝衰竭动物模型中具有显著改善作用。
线粒体除为机体物质代谢提供能量外，还在调控细胞内Ca2+水平、信号传递及细胞死亡等过程中起重要作用。作为线粒体的关键组成部分，电子传递链(ETC)在传递电子时不仅会产生少量活性氧(ROS), 在生理条件下，约95%的ROS来源于ETC。当线粒体受损时，电子传递效率降低, ATP合成受阻，能量代谢也出现障碍[16]。此外，漏出的电子增多也会导致ROS生成增加。当体内ROS水平升高，超过氧化/抗氧化系统的清除能力时，机体会处于氧化应激状态，这也是多种肝脏疾病共同致病机制。在炎症反应过程中, IL-6和IL-6R在炎症细胞的募集中发挥关键作用。由于IL-6受体在肝细胞中呈高表达, IL-6成为促使肝细胞产生急性期蛋白的主要因子，出现急性肝衰竭时，血清中IL-6水平显著上升[17]。肝衰竭常伴有炎症反应和氧化应激反应。彭方毅等[18]和赵高远等[19]发现，肝衰竭发生时, TNF-α含量以及氧化应激指标均发生改变。本研究中，肝衰竭大鼠模型的炎症反应因子TNF-α、IL-1β、IL-10和IL-6含量以及氧化应激指标MDA活性均升高, SOD、GSH水平下降，但丹参酮ⅡA给药后，各组大鼠炎症因子指标和氧化应激指标均明显恢复，同时发现丹参酮ⅡA可明显减少D-GalN诱导的肝衰竭大鼠模型中肝细胞的凋亡。以上结果表明，丹参酮ⅡA可能通过抑制炎症反应和氧化应激减少肝细胞凋亡，进而减轻大鼠肝衰竭。
研究[20-22]表明, ERK1/2信号通路是影响肝星状细胞增殖、活化及诱发肝损伤的重要通路之一，且其与氧化应激相关重要分子SOD、GST、GSH、MDA的异常表达有关, ERK1/2信号通路的激活与肝细胞增殖和肝脏的炎症反应有关。TIAN L等[23]通过抑制ERK1/2炎症信号通路降低MIF-IB、IL-6、TNE、INOS等炎症因子的蛋白表达，从而减轻小鼠肝纤维化的炎症反应。GEHRKE N等[24]发现, I-受体缺失能下调ERK1/2信号通路，从而降低急性肝衰竭小鼠的病死率，表明ERK1/2信号通路的活化与急性肝衰竭的发生有关。本研究发现，大鼠发生肝衰竭时, ERK1/2信号通路异常活化，但丹参酮ⅡA处理后, ERK1/2信号通路明显受到抑制，推测肝衰竭过程中ERK1/2信号通路的异常活化可能引发炎症反应和氧化应激，进而加重肝损伤。可见，氧化应激以及炎症反应在肝衰竭动物模型的损伤中可能发挥重要作用。
综上所述，丹参酮ⅡA可能通过ERK1/2信号通路抑制炎症反应和氧化应激反应，进而缓解D-GalN诱导的大鼠肝衰竭，说明丹参酮ⅡA可能是一种新型治疗药物，具有广阔的临床应用前景。
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表 1 各组大鼠肝功能指标水平比较(Mean±SD)
组别 n AST/(U/L) ALT/(U/L) γ-GT/(U/L) TBIL/(μmol/L) DBIL/(μmol/L) Control组 10 22.34±3.57 31.52±4.49 1.10±0.09 1.25±0.13 0.47±0.04 Model组 10 376.34±35.25* 333.64±43.81* 4.14±0.39* 15.48±1.32* 5.32±0.48* Low-dose组 10 258.16±27.51# 219.47±25.55# 3.16±0.35# 10.21±0.95# 3.43±0.36# High-dose组 10 106.80±13.52#△ 106.32±12.87#△ 1.95±0.21#△ 5.67±0.61#c 1.88±0.22#△ AST: 谷草转氨酶; ALT: 谷丙转氨酶; γ-GT: γ-谷氨酰转肽酶; TBIL: 总胆红素; DBIL: 直接胆红素。与Control组比较, * P < 0.05; 与Model组比较, #P < 0.05; 与Low-dose组比较, △P < 0.05。 
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表 2 各组大鼠肝细胞MI和PCNA阳性表达率比较(Mean±SD)
% 组别 n MI PCNA阳性表达率 Control组 10 3.59±0.34 5.56±0.66 Model组 10 1.55±0.40* 1.76±0.12* Low-dose组 10 6.59±0.70# 25.36±1.80# High-dose组 10 7.38±0.83#△ 30.39±3.59#△ MI: 有丝分裂指数; PCNA: 增殖细胞核抗原。
与Control组比较, * P < 0.05;
与Model组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。
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表 3 各组大鼠炎症因子表达水平比较(Mean±SD)
pg/mL 组别 n TNF-α IL-1β IL-10 IL-6 Control组 10 13.01±1.86 19.03±2.26 4.98±0.29 13.12±0.63 Model组 10 98.58±7.82* 287.27±28.20* 41.81±2.33* 78.18±4.12* Low-dose组 10 77.52±5.21# 167.89±12.81# 28.17±1.58# 49.67±28.53# High-dose组 10 52.21±4.50#△ 80.16±5.25#△ 20.07±2.34#△ 37.16±2.25#△ TNF-α: 肿瘤坏死因子-α; IL: 白细胞介素。与Control组比较, * P < 0.05; 与模型组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。
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表 4 各组大鼠氧化应激指标比较(Mean±SD)
组别 n SOD/(U/mg) GSH/(nmoL/mg) MDA/(μmoL/mg) Control组 10 84.56±2.39 28.73±4.02 0.80±0.05 Model组 10 21.51±1.22* 6.63±0.89* 2.10±0.06* Low-dose组 10 39.41±2.38# 14.43±1.57# 1.65±0.12# High-dose组 10 63.34±3.11#△ 24.83±3.97#△ 1.27±0.07#△ SOD: 超氧化物歧化酶; GSH: 谷胱甘肽; MDA: 丙二醛。与Control组比较, * P < 0.05; 与模型组比较, #P < 0.05; 与低剂量组比较, △P < 0.05。
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