Determination of related substances in diazepam rectal gel by high-performance liquid chromatography
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摘要:目的
建立一种高效液相色谱法, 用于测定地西泮直肠凝胶中的有关物质。
方法采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×150.0 mm, 3.5 μm)色谱柱，以10 mmol/L磷酸二氢钾缓冲液(用0.5 mmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.0)-甲醇为流动相，进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min, 柱温为30 ℃, 检测波长为234 nm。
结果地西泮与已知杂质Ⅰ~Ⅶ的色谱峰具有良好的分离度; 地西泮和已知杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别在0.01~10.05 μg/mL和0.01~9.92 μg/mL、0.01~10.24 μg/mL、0.01~10.18 μg/mL、0.01~10.24 μg/mL范围内呈现良好的线性关系(r2≥0.999), 且其平均回收率均在99%~101%范围内。制剂中的辅料对主成分及有关物质的测定无干扰。
结论该高效液相色谱法专属性强，重复性好，适用于地西泮直肠凝胶中有关物质的检测。
Abstract:ObjectiveTo establish a high-performance liquid chromatography method for the determination of related substances in diazepam rectal gel.
MethodsThe Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 (4.6 mm×150.0 mm, 3.5 μm) column was used with a mobile phase consisting of 10 mmol/L potassium dihydrogen phosphate buffer (adjusted to pH value to 6.0 with 0.5 mmol/L sodium hydroxide solution) and methanol. Gradient elution was performed at a flow rate of 1.0 mL/min, with a column temperature of 30 ℃ and a detection wave length of 234 nm.
ResultsThe chromatographic peaks of diazepam and known impurities Ⅰ to Ⅶ showed good resolution. Diazepam and known impurities Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ, and Ⅳ exhibited good linearity in the concentrations ranging of 0.01 to 10.05 μg/mL, 0.01 to 9.92 μg/mL, 0.01 to 10.24 μg/mL, and 0.01 to 10.18 μg/mL, respectively (r2≥0.999), with average recoveries ranging from 99% to 101%. The excipients in the formulation did not interfere with the determination of the principal component and related substances.
ConclusionThis high-performance liquid chromatography method is highly specific and reproducible, making it suitable for the detection of related substances in diazepam rectal gel.
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Keywords:
- diazepam /
- rectal gel /
- impurities /
- high-performance liquid chromatography /
- relative correction factor /
- epilepsy
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癫痫持续状态(SE)为临床常见的急危重症之一，具有发作类型复杂、致死率高和致残率高等特点[1]。SE患者的预后与发作持续时间密切相关，尽早终止癫痫发作并改善预后是SE治疗的关键目标[1-2]。在医院环境中，地西泮是治疗SE的一线用药[3]。目前，国内批准上市的地西泮制剂仅有片剂、注射剂和鼻腔喷雾剂。然而，院前急救难以迅速为患者建立静脉通道或给予口服给药，因此地西泮直肠给药仍然是临床常用的方法[4]。地西泮直肠凝胶(DiastatⓇ, 2 mL药物含10 mg有效成分)是由瓦利安特制药国际(Valeant)研发的一种用于治疗癫痫的新剂型，于2005年经美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，是迄今唯一获批可供家庭成员和非医疗护理人员使用的癫痫急性发作治疗药物[5]。鉴于中国尚无此类产品上市，本研究团队对地西泮直肠凝胶的原研制剂进行仿制研究。当前各药典均未收录地西泮直肠凝胶剂的质量标准，现有的有关物质检查项目已无法满足新剂型的质量控制需求。因此，本研究基于药典及相关文献，采用高效液相色谱法(HPLC)对地西泮直肠凝胶剂中有关物质的分析方法进行针对性优化，现报告如下。
1. 仪器及试药
1.1 主要仪器
高效液相色谱仪(安捷伦科技，型号1260 infinity Ⅱ); 1/100 000电子天平(梅特勒托利多科技，型号ME55); FiveEasy Plus pH计(梅特勒-托利多科技，型号FE28); Biosafer超声波清洗仪(南京赛飞生物科技，型号SB-5200D); 电热鼓风干燥箱(上海博讯医疗，型号GZX-9023MBE); 鼓风干燥箱(上海一恒，型号DHG-9070A); 药品强光照射试验箱(重庆康诚永生，型号SHH-100GD)。
1.2 试药
地西泮原料药(山东信谊制药，批号161101, 含量100.3%); 杂质Ⅰ: 1-甲基-5-苯基-1, 3-二氢-2H-1, 4-苯并二氮杂-2-酮(实验室自制，批号C19006-16-18, 含量98.0%); 杂质Ⅱ(去甲西泮): 7-氯-1, 3-二氢-5-苯基-2H-1, 4-苯并二氮杂-2-酮(实验室自制，批号C19006-10-18, 含量98.3%); 杂质Ⅲ: 3-氨基-6-氯-1-甲基-4-苯基喹啉-2(1H)-酮(实验室自制，批号C119006-12-20, 含量99.9%); 杂质Ⅳ: 2-甲氨基-5-氯二苯甲酮(襄阳展达生物，批号20190105, 含量98.7%); 杂质Ⅴ: 6-氯-1-甲基-4-苯基喹唑啉-2(1H)-酮(实验室自制，批号C19006-15-20, 含量97.3%); 杂质Ⅵ: N-(2-苯甲酰基-4-氯苯基)-2-氯-N-甲基乙酰胺(实验室自制，批号C19003-16-1, 含量99.5%); 杂质Ⅶ: 7-氯-2-甲氧基-5-苯基-3H-1, 4-苯并二氮平(国药集团，批号31269-33-7, 含量99.5%)。地西泮直肠凝胶(实验室自制，批号N19112901、N19112902、N19112903), 规格2 mL/支(约含地西泮10 mg)。甲醇(分析纯，赛默飞)，实验用水为超纯水，磷酸二氢钾(分析纯，上海阿拉丁)，氢氧化钠(分析纯，国药集团)。
2. 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 杂质对照品混合储备液
取杂质Ⅰ~Ⅶ对照品适量，加入甲醇配制成250 μg/mL混合溶液。
2.1.2 系统适用性溶液
取杂质对照品混合储备液和地西泮原料药适量，加入甲醇配制成含各杂质10 μg和地西泮10 mg的混合溶液。
2.1.3 供试品溶液
取地西泮直肠凝胶2 mL(约含地西泮10 mg), 加入甲醇配制成1 mg/mL地西泮溶液，滤过，即得。
2.2 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×150.0 mm, 3.5 μm); 流动相A为10 mmol/L磷酸二氢钾缓冲溶液(称取磷酸二氢钾13.6 g, 加水溶解并稀释至1 000 mL, 用0.5 mmol/L氢氧化钠溶液调节pH值至(6.00±0.05), 流动相B为甲醇，以流速1.0 mL/min进行梯度洗脱(程序见表 1); 柱温为30 ℃, 检测波长为234 nm, 进样量为10 μL。取系统适用性溶液，按上述色谱条件进样并记录色谱图，结果见表 2、图 1, 二极管阵列检测器光谱图见图 2。本试验中，地西泮和7种杂质达到了基线分离。
表 1 流动相梯度洗脱程序时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 45 55 8 45 55 20 30 70 30 20 80 35 20 80 表 2 系统适用性试验结果化合物 分离度 相对保留时间/min 理论塔板数 杂质Ⅰ — 0.49 4 680.52 杂质Ⅴ 8.36 0.78 5 643.44 杂质Ⅱ 1.93 0.87 5 495.70 地西泮 2.85 1.00 8 312.60 杂质Ⅵ 3.66 1.16 10 640.76 杂质Ⅲ 13.49 1.72 33 651.52 杂质Ⅶ 5.97 1.94 45 846.02 杂质Ⅳ 3.89 2.08 48 746.95 2.3 专属性试验
精密称取地西泮原料药10 mg、地西泮直肠凝胶和空白辅料各2 g, 分别置于20 mL容量瓶内进行强制降解试验[6]。①酸破坏: 精密量取0.3 mol/L盐酸溶液2 mL, 于60 ℃条件下处理0.5 h后，用甲醇溶解并稀释至刻度; ②碱破坏: 精密量取0.3 mol/L氢氧化钠溶液2 mL, 于60 ℃条件下处理0.5 h后，用甲醇溶解并稀释至刻度; ③氧化破坏: 精密量取3%(体积分数)过氧化氢溶液2 mL, 于室温下避光处理5 d后，用甲醇溶解并稀释至刻度; ④高温破坏: 取适量样品，于60 ℃条件下处理7 d后，用甲醇溶解并稀释至刻度; ⑤光照破坏: 取适量样品，于(4 500±500) lux条件下处理7 d后，用甲醇溶解并稀释至刻度[7]。分别取上述各破坏溶液，按“2.2”中所述色谱条件测定并记录色谱图，见图 3。结果显示，在不同破坏条件下，各降解产物的色谱峰均能与主色谱峰完全分离，且地西泮原料药的降解杂质峰与空白辅料的降解杂质峰相互无干扰，表明该方法的专属性良好。同时进行物料平衡计算(以未破坏样品的主峰面积为100%), 结果均在95%~105%, 试验数据见表 3。
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图 3 专属性试验HPLC色谱图A: 未破坏样品; B: 酸破坏样品; C: 碱破坏样品; D: 氧化破坏样品; E: 高温破坏样品; F: 光照破坏样品。0: 空白溶剂; 1: 空白辅料; 2: 地西泮原料药; 3: 地西泮直肠凝胶。表 3 物料平衡数据试验条件 称样量/g 主峰面积/(mAU·min) 总峰面积/(mAU·min) 主成分回收率/% 比值/% 未破坏 2.02 31 871.0 31 871.0 — — 酸 2.00 30 959.7 30 727.0 98.1 97.4 碱 1.99 29 951.7 31 069.3 95.4 99.0 氧化 1.99 29 547.2 30 463.0 94.1 97.0 光照 2.02 31 098.5 33 296.9 97.6 104.5 高温 2.03 32 365.5 33 504.7 101.1 104.6 2.4 线性关系考察及相对校正因子测定
精确称取杂质Ⅰ~Ⅳ和地西泮原料药适量，加入甲醇溶液，分别稀释为0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 μg/mL的单一成分溶液。取上述溶液，按“2.2”中所述色谱条件测定并记录色谱图，以浓度(X, 单位μg/mL)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行线性回归，绘制标准曲线方程，并采用斜率法计算各杂质的相对校正因子[8], 见表 4。结果表明，杂质Ⅰ~Ⅳ和地西泮的线性关系均良好, r2≥0.999; 以地西泮为参照物，杂质Ⅰ、Ⅳ的相对校正因子在0.9~1.1, 测定杂质含量时可不进行校正，杂质Ⅱ、Ⅲ则需要校正。
表 4 地西泮与杂质Ⅰ~Ⅳ的线性关系考察结果及相对校正因子化合物 线性方程 线性范围/(μg/mL) r2 相对校正因子 地西泮 Y=57.711X+371.890 0.01~10.05 0.999 6 1.00 杂质Ⅰ Y=58.048X+0.001 0.01~9.92 0.999 8 1.01 杂质Ⅱ Y=64.928X+0.825 0.01~10.24 0.999 9 1.12 杂质Ⅲ Y=66.112X+1.156 0.01~10.18 0.999 9 1.15 杂质Ⅳ Y=54.939X+1.544 0.01~10.24 0.999 8 0.95 2.5 检测限及定量限测定
取系统适用性溶液，加甲醇逐级稀释后，按照“2.2”中的色谱条件进样测定，按信噪比(S/N)分别为3和10时对应的浓度作为检测限和定量限[9]。结果表明，地西泮和杂质Ⅰ~Ⅳ的检测限分别为0.1和2.8、6.3、6.3、4.0 ng/mL, 定量限分别为30.0和16.7、25.0、25.0、20.0 ng/mL。
2.6 精密度试验
按照“2.1.2”中的方法配制溶液，按照“2.2”中的色谱条件测定，平行进样6次，记录峰面积。结果表明，地西泮和杂质Ⅰ~Ⅳ峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.13%、0.06%、0.38%、0.35%、1.04%，均小于2%，表明仪器精密度良好。
2.7 重复性考察
取地西泮直肠凝胶(批号N19112901), 按照“2.1.3”中的方法配制供试品溶液各6份，按照“2.2”中的色谱条件进样测定，计算各组分峰面积的RSD值。杂质Ⅰ峰面积的RSD为0.06%, 杂质Ⅱ~Ⅳ均未检出，最大未知单杂峰面积的RSD分别为2.60%, 总杂质峰面积的RSD为2.52%, 表明本方法的重复性良好。
2.8 地西泮直肠凝胶的辅料干扰试验
依据处方工艺配制空白辅料凝胶，使用甲醇配制空白辅料溶液，按照“2.2”中的色谱条件测定并记录色谱图，见图 4。结果表明，各辅料对有关物质的检测均无干扰作用。
2.9 回收率试验
称取地西泮原料药50 mg, 置于50 mL容量瓶中，共准备9份。精密量取杂质对照品混合储备液1、2、3 mL各3份，加入上述容量瓶中，加入适量甲醇溶解并稀释，配制成已知杂质水平分别为50%、100%、150%的供试溶液。按“2.2”中的色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算杂质Ⅰ~Ⅳ的平均回收率，试验数据见表 5。结果表明，杂质Ⅰ的平均回收率为99.2%(n=9), RSD为1.17%; 杂质Ⅱ的平均回收率为100.3%(n=9), RSD为1.18%; 杂质Ⅲ的平均回收率为100.7%(n=9), RSD为0.97%; 杂质Ⅳ的平均回收率为100.5%(n=9), RSD为0.78%。本方法所得4种杂质的回收率均符合规定。
表 5 杂质Ⅰ~Ⅳ的回收率测定结果成分 加入量/μg 测得量/μg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 杂质Ⅰ 5.016 5.008 99.8 99.2 1.17 5.063 100.9 4.976 99.2 10.032 9.938 99.1 9.778 97.5 9.957 99.3 15.048 15.170 100.8 14.873 98.8 14.724 97.8 杂质Ⅱ 4.996 5.074 101.6 100.3 1.18 5.072 101.5 5.063 101.3 9.992 10.089 101.0 9.887 98.9 10.089 101.0 14.988 14.927 99.6 14.931 99.6 14.758 98.5 杂质Ⅲ 5.020 5.108 101.8 100.7 0.97 5.097 101.5 5.078 101.2 10.040 10.114 100.7 10.071 100.3 10.231 101.9 15.060 15.126 100.4 15.016 99.7 14.916 99.0 杂质Ⅳ 4.988 5.043 101.1 100.5 0.78 5.041 101.1 5.034 100.9 9.976 9.981 100.1 9.961 99.8 10.148 101.7 14.964 15.031 100.4 15.037 100.5 14.834 99.1 2.10 溶液稳定性试验
精密量取杂质对照品混合储备液2 mL, 置50 mL容量瓶中，再加入地西泮直肠凝胶10 mL, 以甲醇为溶剂制成供试液。室温放置，于0、2、4、8、12、24 h分别取样。按照“2.2”中的色谱条件进样测定，试验数据见表 6。结果表明，地西泮和杂质Ⅰ~Ⅳ待测溶液在24 h内均稳定。
表 6 地西泮和杂质Ⅰ~Ⅳ待测溶液的稳定性试验结果指标 时点 杂质Ⅰ 杂质Ⅱ 杂质Ⅲ 杂质Ⅳ 地西泮 峰面积/(mAU·min) 0 h 580.692 649.893 663.021 552.884 57 753.167 2 h 579.913 649.760 662.337 551.556 57 655.388 4 h 579.773 649.438 661.677 550.780 57 712.519 8 h 579.878 649.904 662.387 550.196 57 581.655 12 h 579.650 648.681 662.343 549.329 57 777.683 24 h 579.905 643.647 667.918 564.688 57 653.245 峰面积均值/(mAU·min) 579.969 648.552 663.281 553.239 57 688.943 峰面积的RSD/% 0.06 0.38 0.35 1.04 0.13 RSD: 相对标准偏差。 2.11 地西泮直肠凝胶有关物质测定
将地西泮直肠凝胶(批号N19112901)分别置于高温条件(40、60 ℃)、光照条件[(4 500±500) lux]下，分别于5、10、30 d后取出，按照“2.1.3”中的方法配制供试品溶液，并按照“2.2”中的色谱条件进样测定。采用加校正因子主成分自身对照法计算杂质Ⅱ、杂质Ⅲ的含量，采用不加校正因子主成分自身对照法计算杂质Ⅰ、杂质Ⅳ~Ⅶ和其他未知杂质的含量[10], 试验数据见表 7。
表 7 地西泮直肠凝胶影响因素试验结果条件 杂质含量/% 杂质Ⅰ 杂质Ⅲ 杂质Ⅳ 杂质Ⅱ、Ⅴ~Ⅶ 最大未知单杂 总杂质 0 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、5 d 0.01 — 0.02 — 0.01 0.04 60 ℃、5 d 0.01 — 0.14 — 0.01 0.16 光照、5 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、10 d 0.01 — 0.03 — 0.01 0.05 60 ℃、10 d 0.01 0.02 0.28 — 0.01 0.32 光照、10 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、30 d 0.01 — 0.10 — 0.01 0.12 60 ℃、30 d 0.01 0.05 0.92 — 0.01 0.99 光照、30 d 0.01 — — — 0.01 0.02 3. 讨论
3.1 色谱条件优化
本研究筛选流动相时，参考药典[11]中的原料药、片剂和注射剂等杂质检查项下的色谱条件，调节流动相比例，改变洗脱能力，最终选择梯度洗脱方式，实现了地西泮色谱峰与杂质Ⅰ~Ⅶ色谱峰达到基线分离。相关研究[12]比较不同缓冲液及水相pH值对分离效果的影响发现，磷酸盐的分离效果显著优于0.1%(体积分数)磷酸，考虑到地西泮的pKa值[13]和磷酸盐的缓冲范围，本研究最终选定pH值为6.0的磷酸二氢钾缓冲液。这种方法不仅降低了缓冲盐的浓度，提高了检测方法的耐用性，还延长了色谱柱的使用寿命，降低了实验成本。虽然美国药典(USP46)、中国药典(2020)和欧洲药典(EP11)均选用254 nm作为地西泮及其制剂有关物质的检测波长，但本研究使用二极管阵列检测器对地西泮、杂质Ⅰ~Ⅶ及各破坏条件下产生的降解杂质进行全波长(190~400 nm)扫描后发现, 234 nm波长处地西泮及其有关物质均具有最大的吸收[14], 且在该波长下基线平稳，各峰分离度良好，无其他杂峰干扰，故本研究选择234 nm作为检测波长。
3.2 强制降解试验
降解试验结果显示，地西泮原料药和空白辅料在酸、碱、氧化、高温和强光照等破坏条件下会产生降解[15], 且在设定的色谱条件下，各杂质峰之间无相互干扰。基于系统适用性溶液进行杂质定位，初步确定产生杂质Ⅲ和杂质Ⅳ。对酸、碱破坏条件下的供试品溶液进行中和后进样，本研究发现原先产生的最大单杂峰面积明显减小，结合地西泮的化学结构推测，这可能是水解产生的可逆开环物[16]。值得注意的是，对降解杂质的结构分析还需进一步深入，以便更好控制地西泮直肠凝胶的质量。
3.3 影响因素试验
稳定性试验结果显示，地西泮直肠凝胶在40 ℃条件下会产生杂质Ⅳ; 在60 ℃条件下会产生杂质Ⅲ和杂质Ⅳ，其中杂质Ⅳ的增长尤为显著; 在光照条件下则未检出新增杂质。由于地西泮直肠凝胶是一种半固体水溶性制剂，其处方中含有较高比例的水分，本研究未考察供试品在高湿条件下的降解情况。地西泮直肠凝胶对温度较为敏感，在高温条件下会产生主要杂质[17]。
3.4 小结
本研究基于地西泮原料药的合成工艺与降解途径，结合地西泮原料药及其制剂的强制降解试验与影响因素试验结果，确定了地西泮直肠凝胶可能产生的7种杂质，并建立了一种高效且专属性强的HPLC用于地西泮直肠凝胶有关物质的检测，为保障药品质量、优化制剂工艺及筛选辅料提供了参考依据。杂质Ⅰ、Ⅱ是本研究所用批次原料药中自带的工艺杂质; 杂质Ⅲ、Ⅳ是地西泮直肠凝胶影响因素实验中产生的降解杂质，也是地西泮直肠凝胶的主要杂质; 杂质Ⅴ~Ⅶ是地西泮直肠凝胶强制降解试验中产生的降解杂质，但其在影响因素试验中未被检出，故本研究仅对杂质Ⅰ~Ⅳ进行方法学验证。
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图 3 专属性试验HPLC色谱图
A: 未破坏样品; B: 酸破坏样品; C: 碱破坏样品; D: 氧化破坏样品; E: 高温破坏样品; F: 光照破坏样品。0: 空白溶剂; 1: 空白辅料; 2: 地西泮原料药; 3: 地西泮直肠凝胶。
表 2 系统适用性试验结果
化合物 分离度 相对保留时间/min 理论塔板数 杂质Ⅰ — 0.49 4 680.52 杂质Ⅴ 8.36 0.78 5 643.44 杂质Ⅱ 1.93 0.87 5 495.70 地西泮 2.85 1.00 8 312.60 杂质Ⅵ 3.66 1.16 10 640.76 杂质Ⅲ 13.49 1.72 33 651.52 杂质Ⅶ 5.97 1.94 45 846.02 杂质Ⅳ 3.89 2.08 48 746.95 
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表 3 物料平衡数据
试验条件 称样量/g 主峰面积/(mAU·min) 总峰面积/(mAU·min) 主成分回收率/% 比值/% 未破坏 2.02 31 871.0 31 871.0 — — 酸 2.00 30 959.7 30 727.0 98.1 97.4 碱 1.99 29 951.7 31 069.3 95.4 99.0 氧化 1.99 29 547.2 30 463.0 94.1 97.0 光照 2.02 31 098.5 33 296.9 97.6 104.5 高温 2.03 32 365.5 33 504.7 101.1 104.6
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表 4 地西泮与杂质Ⅰ~Ⅳ的线性关系考察结果及相对校正因子
化合物 线性方程 线性范围/(μg/mL) r2 相对校正因子 地西泮 Y=57.711X+371.890 0.01~10.05 0.999 6 1.00 杂质Ⅰ Y=58.048X+0.001 0.01~9.92 0.999 8 1.01 杂质Ⅱ Y=64.928X+0.825 0.01~10.24 0.999 9 1.12 杂质Ⅲ Y=66.112X+1.156 0.01~10.18 0.999 9 1.15 杂质Ⅳ Y=54.939X+1.544 0.01~10.24 0.999 8 0.95
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表 5 杂质Ⅰ~Ⅳ的回收率测定结果
成分 加入量/μg 测得量/μg 回收率/% 平均回收率/% RSD/% 杂质Ⅰ 5.016 5.008 99.8 99.2 1.17 5.063 100.9 4.976 99.2 10.032 9.938 99.1 9.778 97.5 9.957 99.3 15.048 15.170 100.8 14.873 98.8 14.724 97.8 杂质Ⅱ 4.996 5.074 101.6 100.3 1.18 5.072 101.5 5.063 101.3 9.992 10.089 101.0 9.887 98.9 10.089 101.0 14.988 14.927 99.6 14.931 99.6 14.758 98.5 杂质Ⅲ 5.020 5.108 101.8 100.7 0.97 5.097 101.5 5.078 101.2 10.040 10.114 100.7 10.071 100.3 10.231 101.9 15.060 15.126 100.4 15.016 99.7 14.916 99.0 杂质Ⅳ 4.988 5.043 101.1 100.5 0.78 5.041 101.1 5.034 100.9 9.976 9.981 100.1 9.961 99.8 10.148 101.7 14.964 15.031 100.4 15.037 100.5 14.834 99.1
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表 6 地西泮和杂质Ⅰ~Ⅳ待测溶液的稳定性试验结果
指标 时点 杂质Ⅰ 杂质Ⅱ 杂质Ⅲ 杂质Ⅳ 地西泮 峰面积/(mAU·min) 0 h 580.692 649.893 663.021 552.884 57 753.167 2 h 579.913 649.760 662.337 551.556 57 655.388 4 h 579.773 649.438 661.677 550.780 57 712.519 8 h 579.878 649.904 662.387 550.196 57 581.655 12 h 579.650 648.681 662.343 549.329 57 777.683 24 h 579.905 643.647 667.918 564.688 57 653.245 峰面积均值/(mAU·min) 579.969 648.552 663.281 553.239 57 688.943 峰面积的RSD/% 0.06 0.38 0.35 1.04 0.13 RSD: 相对标准偏差。
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表 7 地西泮直肠凝胶影响因素试验结果
条件 杂质含量/% 杂质Ⅰ 杂质Ⅲ 杂质Ⅳ 杂质Ⅱ、Ⅴ~Ⅶ 最大未知单杂 总杂质 0 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、5 d 0.01 — 0.02 — 0.01 0.04 60 ℃、5 d 0.01 — 0.14 — 0.01 0.16 光照、5 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、10 d 0.01 — 0.03 — 0.01 0.05 60 ℃、10 d 0.01 0.02 0.28 — 0.01 0.32 光照、10 d 0.01 — — — 0.01 0.02 40 ℃、30 d 0.01 — 0.10 — 0.01 0.12 60 ℃、30 d 0.01 0.05 0.92 — 0.01 0.99 光照、30 d 0.01 — — — 0.01 0.02
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