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傅奕, 裴冬生, 陆梁, 胡书群, 赵惠仁. 人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析[J]. 实用临床医药杂志, 2008, (5): 24-27,41. DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.05.007
引用本文: 傅奕, 裴冬生, 陆梁, 胡书群, 赵惠仁. 人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析[J]. 实用临床医药杂志, 2008, (5): 24-27,41. DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.05.007
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FU Yi, PEI Dong-sheng, LU Liang, HU Shu-qun, ZHAO Hui-Ren. The Construction of Human IL-18 Mutant D134R and Its Effects on hIL-18 Biological Activity[J]. Journal of Clinical Medicine in Practice, 2008, (5): 24-27,41. DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.05.007
Citation: FU Yi, PEI Dong-sheng, LU Liang, HU Shu-qun, ZHAO Hui-Ren. The Construction of Human IL-18 Mutant D134R and Its Effects on hIL-18 Biological Activity[J]. Journal of Clinical Medicine in Practice, 2008, (5): 24-27,41. DOI: 10.3969/j.issn.1672-2353.2008.05.007
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人IL-18突变体D134R的构建及其生物学活性分析

The Construction of Human IL-18 Mutant D134R and Its Effects on hIL-18 Biological Activity

    摘要
  • 摘要: 目的 研究IL-18结构与功能的关系.方法 用重叠延伸PCR定点突变技术构建人白介素18(hIL-18)突变体hIL-18D134R.将突变体cDNA与原核表达载体pJW2重组并转化大肠杆菌DH5α.经热诱导表达蛋白质,SDS-PAGE证实,表达的目的蛋白质以包涵体形式存在.菌体经超声破碎后,包涵体以2 mol/L尿素洗涤,8 mol/L尿素溶解,并经Sephadex G-75柱纯化及稀释、透析复性.然后以诱导人外周血单个核细胞(PBMC)产生干扰素-γ(IFN-γ)及对核因子-κB(NF-κB)的激活能力为指标,检测突变体的生物学活性.结果构建的突变体hIL-18D134R可在大肠杆菌DH5α中高效表达,经包涵体洗涤和Sephadex G-75柱纯化后,纯度达92 %以上.突变体D134R对IFN-γ的诱生能力及对NF-κB的激活能力分别为野生型hIL-18的19%和23%.结论 在人IL-18的氨基酸序列中,Asp134对其生物学功能有非常重要的作用.

     

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