Study on the basophil activation situation of patients being allergic to pollen of phoenix roebelenii and fishtail palm
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摘要:目的 探讨软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的嗜碱性粒细胞活化情况。方法 选取83例软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者纳入观察组，另选取同时期83例健康体检者纳入对照组。比较2组嗜碱性粒细胞活化指标(CD63、CD203c及CD45)荧光强度，并比较观察组内不同过敏原类型、过敏原种数及UniCAP分级者的检测结果，采用Spearman秩相关分析探讨嗜碱性粒细胞活化指标荧光强度与UniCAP分级的关系。结果 观察组的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45的荧光强度为(32.26±2.23)、(50.31±5.61)及(36.36±5.03), 分别高于对照组的(6.15±1.20)、(18.28±2.63)及(7.02±1.36), 差异有统计学意义(P < 0.05)。观察组内不同过敏原类型及不同过敏原种数患者的检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05); UniCAP分级5~6级者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、CD45的荧光强度为(38.16±3.15)、(66.73±6.96)、(50.86±6.59)，分别高于UniCAP分级3~4级者的(29.37±2.31)、(51.13±5.78)、(39.10±5.13)和UniCAP分级1~2级者的(18.68±1.76)、(29.36±3.79)、(22.32±1.93), 且UniCAP分级3~4级者高于UniCAP分级1~2级者，差异均有统计学意义(P < 0.05); Spearman秩相关分析显示，嗜碱性粒细胞活化指标CD63、CD203c、CD45均与UniCAP分级呈正相关(P < 0.05)。结论 软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况突出，且活化指标CD63、CD203c、CD45表达程度与UniCAP分级密切相关，具有较高的检测价值。Abstract:Objective To investigate the basophil activation situation of patients being allergic to pollen of phoenix roebelenii and fishtail palm.Methods A total of 83 patients being allergic to pollen of phoenix roebelenii and fishtail palm were chosen as observation group, 83 healthy persons at the same time were chosen as control group. The fluorescence intensity of basophil activation situation(CD63, CD203c and CD45)of two groups were compared, and the detection results of observation group with different allergens, kinds and UniCAP classifications were compared, and the relationships between the fluorescence intensity of basophil activation indexes and UniCAP classifications were analyzed by Spearman rank correlation analysis.Results The fluorescence intensities of basophil activation of CD63, CD203c and CD45 of the observation group were(32.26±2.23), (50.31±5.61) and (36.36±5.03), respectively, and they were significantly higher than (6.15±1.20), (18.28±2.63) and (7.02±1.36) of the control group(P < 0.05). There were no statistically significant differences in detection results of the observation group with different allergens and kinds (P>0.05). The fluorescence intensities of basophil activation CD63, CD203c and CD45 of the observation group with UniCAP classifications 5 to 6 were(38.16±3.15), (66.73±6.96) and (50.86±6.59), respectively, which were significantly higher than (29.37±2.31), (51.13±5.78) and(39.10±5.13) of UniCAP classifications 3 to 4 and (18.68±1.76), (29.36±3.79) and (22.32± 1.93) of 1 to 2 grading of UniCAP classification. The Spearman rank correlation analysis showed the basophil activation indexes such as CD63, CD203c and CD45 were positively correlated with UniCAP classifications(P < 0.05).Conclusion The basophil activation situation of patients being allergic to pollen of phoenix roebelenii and fishtail palm are obvious, and the expression degree are close to the UniCAP classifications, so the detection value are higher.
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花粉过敏在临床较常见，而软叶针葵和鱼尾葵花作为海南地区常见的植物，其导致的变态反应多见[1-2]。嗜碱性粒细胞活化作为在变态反应性疾病中研究较多的指标，在花粉所致变态反应中的研究较热[3-5], 但关于软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化的临床研究很少。鉴于此，本研究探讨了软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况，现将结果报告如下。
1. 资料与方法
1.1 一般资料
选取2018年3月—2020年2月本院收治的83例软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者纳入观察组，另选取同时期83名健康体检者纳入对照组。纳入标准: ①年龄18~65岁者; ②观察组患者符合《变应性鼻炎诊断和治疗指南(2015年，天津)》中的变应性鼻炎诊断标准，且为软叶针葵花粉和(或)鱼尾葵花粉致敏者; ③对研究知情同意者。排除标准: ①合并慢性基础疾病者; ② 2周内发生上呼吸道感染者; ③1个月内应用抗过敏药物治疗者。对照组男46例，女37例，年龄19~65岁，平均(35.54±5.93)岁。观察组男47例，女36例; 年龄20~63岁，平均(35.35±5.73)岁; 过敏原为软叶针葵花粉致敏63例，鱼尾葵花粉致敏50例; 过敏原种数为1种者53例(单一软叶针葵花粉致敏33例，鱼尾葵花粉致敏20例), 2种者30例; UniCAP分级为1~2级者30例, 3~4级者30例, 5~6级者23例。2组性别、年龄情况比较，差异无统计学意义(P>0.05), 具有可比性。
变应性鼻炎的诊断标准: ①鼻塞、流涕、鼻痒等症状出现2种以上，可伴有眼痒、流泪、眼红，症状持续存在或每天累计1 h以上; ②鼻黏膜苍白、水肿、水样分泌物。变应原检测(皮肤点刺试验): 采用冷冻研磨法对软叶针葵花粉、鱼尾葵花粉的粗蛋白进行提取，分别采用液氮反复研磨及磷酸盐缓冲液(PBS)溶解搅拌，离心取上清液作为致敏原，将其滴于患者前臂，然后以点刺针取1小滴(稍大于针尖)于皮肤表层轻轻刺入，并以生理盐水作为阴性对照液, 15 min内出现红肿块或颜色改变则为阳性。入选患者可能同时合并有其他花粉过敏(皮试时为多种花粉过敏原同时检测)。
1.2 方法
采集2组研究对象的静脉血标本待检，将100 μL抗凝血加入流式细胞专用管，以15 μL变应原浸液加入，混匀，于37 ℃下水浴5 min, 终止反应，同时设置未活化的对照，采用溶血素进行处理，时间为10 min, 离心去除上清液，将单克隆抗体加入，避光放置20 min, 离心洗涤2次，待检，上机检测，观察嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45的荧光强度。上述操作均由2名经验丰富的工作人员严格按照标准进行操作。统计并比较2组的嗜碱性粒细胞(CD63、CD203c及CD45)活化情况，并比较观察组内不同过敏原类型、过敏原种数及UniCAP分级者的检测结果，采用Spearman秩相关分析探讨嗜碱性粒细胞活化指标与UniCAP分级的关系。
1.3 评价标准
UniCAP分级是评估变态反应程度的有效标准之一，以血清特异性IgE水平为依据进行评估，大于0.35 kUA/L为阳性，0级为阴性，随着变态反应程度升高，其分级逐渐升高(1~6级)[6]。
1.4 统计学分析
采用SPSS 23.0统计学软件分析数据，计数资料的比较行χ2检验，计量资料的比较行t检验，重复测量的计量资料比较进行方差分析，研究指标间的关系分析进行Spearman秩相关分析, P < 0.05为差异有统计学意义。
2. 结果
2.1 2组嗜碱性粒细胞活化情况比较
观察组嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45的荧光强度高于对照组，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 1。
表 1 2组嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)组别 n CD63 CD203c CD45 对照组 83 6.15±1.20 18.28±2.63 7.02±1.36 观察组 83 32.26±2.23* 50.31±5.61* 36.36±5.03* 与对照组比较, *P < 0.05。 2.2 观察组内不同过敏原类型患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较
观察组中不同过敏原类型患者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45荧光强度比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见表 2。
表 2 观察组内不同过敏原类型患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)过敏原类型 n CD63 CD203c CD45 软叶针葵花粉 33 32.76±2.30 50.51±5.50 36.39±4.93 鱼尾葵花粉 20 31.90±2.20 49.93±5.76 37.11±5.15 软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉 30 32.66±2.26 50.30±5.60 36.26±5.06 2.3 观察组内不同过敏原种数患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较
观察组内不同过敏原种数患者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45荧光强度比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见表 3。
表 3 观察组内不同过敏原种数患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)过敏原种数 n CD63 CD203c CD45 1种 53 32.22±2.18 49.79±5.39 38.28±5.01 2种 30 33.01±2.31 50.62±5.70 39.21±5.22 2.4 观察组内不同UniCAP分级患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较
观察组中不同UniCAP分级者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45荧光强度比较，差异有统计学意义(P < 0.05), 主要表现为UniCAP分级5~6级者的荧光强度高于1~2级及3~4级者，而3~4级者的荧光强度高于1~2级者，差异有统计学意义(P < 0.05), 见表 4。
表 4 观察组内不同UniCAP分级患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)UniCAP分级 n CD63 CD203c CD45 1~2级 30 18.68±1.76* 29.36±3.79* 22.32±1.93* 3~4级 30 29.37±2.31*# 51.13±5.78*# 39.10±5.13*# 5~6级 23 38.16±3.15 66.73±6.96 50.86±6.59 与5~6级比较, *P < 0.05; 与1~2级比较, #P < 0.05。 2.5 嗜碱性粒细胞活化指标与软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者UniCAP分级的关系分析
Spearman秩相关分析结果显示，嗜碱性粒细胞活化指标CD63、CD203c、CD45与软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的UniCAP分级均呈正相关(rs=0.911、0.876、0.903, P < 0.05)。
3. 讨论
花粉所致变态反应在临床常见，而在海南地区，软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉所致变态反应患者占比较高。花粉所致过敏属于Ⅰ型超敏反应，由特异性IgE介导，其吸附于嗜碱性粒细胞[7-8], 因此嗜碱性粒细胞活化情况在变态反应性疾病尤其是花粉所致过敏方面具有较高的研究意义[9-10]。CD63、CD203c及CD45作为嗜碱性粒细胞活化的特异性标志物，其在嗜碱性粒细胞活化过程中呈现显著升高的状态[11-12]。临床中关于软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉所致变态反应患者的嗜碱性粒细胞活化研究极为匮乏，本研究观察了此类患者嗜碱性粒细胞活化情况，旨在为软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的诊断与治疗提供参考依据。
本研究中，软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、CD45荧光强度均高于健康者，差异有统计学意义(P < 0.05), 且UniCAP分级较高患者的荧光强度高于分级较低者，差异有统计学意义(P < 0.05), 但不同过敏原类型及不同过敏原种数患者的检测结果比较，差异无统计学意义(P>0.05)。本研究Spearman秩相关分析结果显示，嗜碱性粒细胞活化指标CD63、CD203c、CD45均与UniCAP分级呈正相关(P < 0.05)，由此肯定了嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45在软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者中的检测意义，并说明其对于变态反应程度有一定的反映价值，但对于这2类花粉的鉴别诊断及种类分析无明显价值。分析原因，软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏情况促进了特异性IgE的表达[13-15], 进而使与之相关的嗜碱性粒细胞活化情况增强，相关标志物CD63、CD203c及CD45荧光强度显著升高[16-17], 而随着变态反应程度的增强，特异性IgE表达升高，嗜碱性粒细胞活化也随之显著增强，但不同花粉所致变态反应导致的上述差异并不显著，仅与变态反应程度有关[18-20], 故不同花粉及不同过敏原种数者的表达差异并不显著。由此类推，上述嗜碱性粒细胞活化情况可能仅与Ⅰ型超敏反应程度有关[21-25], 而其对于过敏原的针对性了解价值并不显著。
综上所述，软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况突出，且活化指标CD63、CD203c、CD45表达程度与UniCAP分级密切相关，具有较高的检测价值。
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表 1 2组嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)
组别 n CD63 CD203c CD45 对照组 83 6.15±1.20 18.28±2.63 7.02±1.36 观察组 83 32.26±2.23* 50.31±5.61* 36.36±5.03* 与对照组比较, *P < 0.05。 
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表 2 观察组内不同过敏原类型患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)
过敏原类型 n CD63 CD203c CD45 软叶针葵花粉 33 32.76±2.30 50.51±5.50 36.39±4.93 鱼尾葵花粉 20 31.90±2.20 49.93±5.76 37.11±5.15 软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉 30 32.66±2.26 50.30±5.60 36.26±5.06
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表 3 观察组内不同过敏原种数患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)
过敏原种数 n CD63 CD203c CD45 1种 53 32.22±2.18 49.79±5.39 38.28±5.01 2种 30 33.01±2.31 50.62±5.70 39.21±5.22
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表 4 观察组内不同UniCAP分级患者的嗜碱性粒细胞活化情况比较(x±s)
UniCAP分级 n CD63 CD203c CD45 1~2级 30 18.68±1.76* 29.36±3.79* 22.32±1.93* 3~4级 30 29.37±2.31*# 51.13±5.78*# 39.10±5.13*# 5~6级 23 38.16±3.15 66.73±6.96 50.86±6.59 与5~6级比较, *P < 0.05; 与1~2级比较, #P < 0.05。
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